Методы фиксации препаратов

Тепловая фиксация. Предметное стекло с нанесенным материалом проводят трижды над пламенем горелки, держа мазком вверх. Время фиксации не должно превышать 5-6 секунд. Спорообразующие бактерии при этом не погибают, и в этом случае мазки следует считать инфекционными.

Химическая фиксация. Эти методы требуют больше времени, но дают более достоверные данные по морфологии клеток. Известно много способов химической фиксации.

- Фиксация этиловым 95° спиртом, экспозиция 10-15 минут.

- Фиксация спирт-эфиром (по Никифорову) — смесь равных объемов абсолютного спирта и эфира, экспозиция 10-15 минут.

- Фиксация метиловым спиртом, экспозиция 2-3 минуты.

- Фиксация ацетоном, экспозиция 5 минут.

- Фиксация сулемой (1%-ный раствор), экспозиция 10-15 минут, промывание раствором NaCl и водой.

- Фиксация азотнокислым серебром (10%-ный раствор), экспозиция 10 минут.

- Фиксация по Шаудину. Фиксатор (насыщенный водный раствор НgС1₂ — 2 части и абсолютный этанол 1 часть) нагревают до 45-50° С, экспозиция 1-2 минуты. Срок хранения фиксатора неограниченный.

- Фиксация жидкостью Карнуа. Фиксатор: спирт 96° — 60 мл, хлороформ — 30 мл, ледяная уксусная кислота — 10 мл. Экспозиция 10-15 минут. Метод удобен при изучении структур клетки. Из-за лизиса эритроцитов нельзя использовать для фиксации мазков-отпечатков и мазков крови.

При фиксации мазков из костного мозга, молока, яиц, где содержится жир, или других препаратов подобного типа их после фиксации предварительно помещают на 2 минуты в эфир или хлороформ и затем окрашивают. Для устранения влияния посторонних белков на качество окрашивания используют следующие методические приемы.

Метод 1. Высушенный на воздухе мазок фиксируют на воздухе 1 минуту в 95%-ном этаноле, затем выдерживают 5-10 секунд в хлороформе и далее 5-15 мин в воде. Препарат высушивают на воздухе. Окрашивают по Граму, высушивают и опускают на 15 мин или 6 часов в смесь, состоящую из равных объемов метилсалицилата и метилбензоата, в зависимости от того, насколько толстый мазок.

Метод 2. Мазок фиксируют и помещают на 2 мин в 2%-ный водный раствор уксусной кислоты. Затем препарат ополаскивают 95%-ным этанолом и погружают в него на 2 мин. На заключительном этапе мазок отмывают водой и окрашивают.

При работе с препаратами из крови, экссудатов целесообразно проводить фиксацию парами формальдегида: мазок в течение 5-10 секунд держат над открытым флаконом с 40%-ным формалином.