Изучение эфирного масла полыни эстрагон методом ГЖХ

Объектом исследования в настоящей работе являлся образец эфирного масла полыни эстрагон, полученный в соответствии с фармакопейным методом 1 (метод Гинзберга) [31].

Для качественного анализа был выбран метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ) [58, 117, 135].

В процессе эксперимента проводился тщательный выбор неподвижной фазы, а также подготовка колонки к работе.

Выбор неподвижной фазы

В качестве неподвижной жидкой фазы в работе использовался силикон SE-ЗО, имеющий температурные пределы использования 50-300 °С [58]. Твердым носителем являлся Chromaton N-AW. Использовался готовый сорбент, полученный нанесением SE-ЗО на твердый носитель в количестве 5 % масс.

Подготовка колонки и ее заполнение.

Хроматографическую колонку промывают сначала водой, затем 20 мл ацетона, прокаливают в течение нескольких часов в сушильном шкафу при температуре 150°С. Для заполнения колонки один из ее концов закрывают пробкой из стекловолокна и присоединяют к водоструйному

насосу. К другому концу присоединяют небольшую воронку, через которую засыпают сорбент небольшими порциями. Для уплотнения сорбента по колонке постукивают деревянной палочкой. По окончании заполнения колонки сорбентом второй ее конец также закрывают пробкой из стекловолокна.

Затем проводят кондиционирование колонки. Для этого устанавливают ее в термостат, присоединяют один конец к источнику газа- носителя, а другой оставляют открытым. В течение четырех часов продувают колонку азотом при температуре 200°С.

Методика эксперимента

В работе использовался следующий режим работы хроматографа: температура колонки 140°-160“С; температура детектора 17О’-19О*С; температура испарителя 170°-190°С; скорость диаграммной ленты 240 мм/ч; скорость газа носителя 30 мл/мин.

Анализируемую пробу растворяли в смеси этанола и четыреххлористого углерода (1:1) и вводили в хроматограф шприцем емкостью 10 мкл. Хроматограмма раствора эфирного масла полыни эстрагон, полученная при температуре колонки Т =150 ’С, представлена выходом 10 пиков веществ и отображена на рис.33.

Идентификация полученных на хроматограмме (рис. 33) пиков компонентов проводилась при помощи веществ, выбранных в качестве стандартов, а именно: индивидуальное вещество - фенилпропаноид метилэвгенол, полученный методом колоночной хроматографии из травы полыни эстрагон и идентифицированный с помощью метода ЯМР- спектроскопии (глава 3), а также эвгенол, тимол, лимонен, масло фенхеля. В целях подбора условий эксперимента нами использовано для исследования эфирное масло фенхеля, доминирующим компонентом которого является фенилпропаноид анетол. По своим физико-химическим характеристикам анетол близок к компоненам эфирного масла полыни

эстрагон - фенилпропаноидам метилхавиколу и эстраголу которые упоминаются в литературных источниках [132, 123]. Имеются

литературные данные, отмечающие наличие в эфирном масле сибирских видов полыней таких компонентов, как эвгенол, тимол, лимонен [132, 123]. В связи с указанным обстоятельством вышеперечисленные соединения взяты нами в качестве стандартных веществ для ГЖХ-анализа.

Хроматографический анализ показал отсутствие соответствий во временах удерживания стандартных веществ (эвгенол, тимол, лимонен), времени удерживания компонентов эфирного масла фенхеля с показателем времен удерживания компонентов анализируемого образца эфирного масла полыни эстрагон (табл. 20). Установлено, что время удерживания стандартного вещества метилэвгенола (t = 6’39”) соответствует времени удерживания одного из компонентов эфирного масла полыни эстрагон (t = 6’35”), пики которого были зарегистрированы на хроматограмме (рис.

В целях уточнения хроматографических характеристик деления веществ нами были созданы условия ступенчатого программирования: первая часть хроматограммы выполнена при температуре 150 °С (рис. 34), вторая часть - при более высокой 160 °С (рис. 35). Таким образом, пики растворителя и компонентов 2 и 3, которые имеют на хроматограмме (рис. 33) максимальные высоты, были четко зарегистрированы с использованием пробы меньшего объема при температуре 150 "С (рис.34). Пики веществ 3-10, которые на хроматограмме (рис.33) регистрировались нечетко, были получены корректно с использованием пробы большого объема в условиях 160 ’С (рис. 35).

Таблица 20

Рис.

Т колонки = 150°С;

1 - растворитель;

2-10 - компоненты эфирного масла полыни эстрагон (3- метилэвгенол).

ГЖХ-анализ компонентного состава эфирного масла полыни эстрагон

Рис. 34. Хроматограмма эфирного масла полыни эстрагон (150^вС) 1 - растворитель;

2-10 - компоненты эфирного масла полыни эстрагон (3- метилэвгенол).

t, мин 10 5 О

ді ............... і і I і ■ — і «—

30 25 20 15 10 5 0

t, МИН

Рис. 35. Хроматограмма эфирного масла полыни эстрагон (160’С) 1 - растворитель;

2-10 - компоненты эфирного масла полыни эстрагон (3- метилэвгенол).

Таким образом, с использованием насадочной колонки с малополярной неподвижной фазой SE-ЗО получена хроматограмма эфирного масла полыни эстрагон в смеси растворителей этанол- четыреххлористый углерод, на которой зарегистрированы пики 10 компонентов изучаемой субстанции. При этом идентифицирован основной компонент эфирного масла полыни эстрагон, именно: метилэвгенол.

5.5.