Научное обоснование целесообразности использования в медицинской практике настоя и настойки полыни эстрагон.

На основании проведенных фотохимических исследований была обоснована целесообразность применения травы и препаратов (настой, настойка) полыни эстрагон в медицинской практике с точки зрения содержания в растении биологически активных веществ - эфирного масла флавоноидов и фенилпропаноидов.

Проведены исследования по изучению антимикробной, противогрибковой активности разрабатываемых препаратов с целью применения препаратов полыни эстрагон в качестве антимикробных и регенерирующих средств.

5.5.1. Изучение антимикробной активности препаратов полыни эстрагон

С целью изучения антимикробной активности травы и препаратов полыни эстрагон были рассмотрены различные лекарственные средства на основе данного растения. Исследована антимикробная активность настоя травы полыни эстрагон и образцы настойки полыни эстрагон на этиловом спирте различных концентраций (40 %, 70 % и 96 %).

Действие изучаемых препаратов проверялось на бактериях, являющихся причиной послеоперационных осложнений. На сегодняшний день в большинстве случаев из очагов воспаления высевается кишечная палочка, золотистый стафилоккок, синегнойная палочка, протей, а также

стрептококки, микрококки, энтеробактерии, грибы рода Candida [35, 60, 106]. Антимикробная активность препаратов в отношении 4-х наиболее встречаемых микроорганизмов исследована методом бумажных дисков (качественная оценка) и методом серийных разведений (количественная оценка) [35, 40, 60, 74, 75, 77, 78, 102,151].

Изучение препаратов полыни эстрагон методом бумажных дисков

Для качественной оценки препараты изучались методом бумажных дисков (табл. 24). На поверхность плотной питательной среды методом газона засевалась эталонная культура золотистого стафилококка штамма Р - 109, а затем на равном расстоянии размещались диски фильтровальной бумаги. На диски микропипеткой наносились препараты полыни эстрагон (настой и настойка) по 0,01 мл.

В качестве контроля использовали стандартные диски с нанесенными на них спиртом в концентрации 40 %, 70 %, 96 % в том же количестве. В качестве препаратов сравнения также применялись: лекарственные средства растительного происхождения - настойка эвкалипта, настойка чистотела, сангвиритрин (состав препарата - сумма алкалоидов, выделенных из маклеи сердцевидной и маклеи мелкоплодной), а также некоторые известные синтетические лекарственные препараты - раствор фурациллина 0,02 %, раствор перманганата калия 5 %, димексид, хлоргексидин.

Посевы помещались на сутки в термостат (t = 37 °С), после чего учитывались результаты. Антимикробная активность анализируемых образцов оценивалась по диаметру (d) зоны задержки роста штамма микроорганизма. Данный опыт повторялся трижды, вычислялось среднее значение для каждой позиции (табл. 24).

Таблица 24

Качественная сравнительная оценка антимикробной активности препаратов полыни эстрагон (метод бумажных дисков)

Из табл.

Настойка полыни эстрагон (на 70 % этиловом спирте) проявила небольшую антимикробную активность (диаметр зоны задержки роста - 1 мм), однако исходя из результатов исследований (диаметр зоны задержки роста в случае 70 % этилового спирта - 0,5 мм), вклад в антимикробную активность изучаемого препарата вносят также действующие вещества растения. Результаты сравнительной качественной оценки показали также сопоставимость антимикробной активности настойки полыни эстрагон с настойкой чистотела, 5 % раствором перманганата калия и 0,02 % раствором фурацилина, традиционно используемыми в антисептике.

С учетом полученных данных проводилось изучение препаратов полыни эстрагон для количественной оценки антимикробной активности на основе метода серийных разведений.

Изучение препаратов полыни эстрагон

методом серийных разведений

Для количественной характеристики антимикробной активности препаратов полыни эстрагон (настой, настойки на 40 %, 70 % и 96 % этиловом спирте). Во флакон с 20 мл расплавленой и остуженной до 56 °С питательной среды вносились препараты полыни эстрагон до концентрации 100; 50; 12,5 и 6,25 мг/мл, перемешивались и заливались в стерильные чашки Петри.

После застывания среды чашки засевались музейными тест - штаммами микроорганизмов, а через сутки инкубирования в термостате учитывались результаты опытов. Результат исследования учитывался по наличию или отсутствию роста микроорганизма.

Средние данные двух опытов приведены табл. 25. В качестве стандартных образцов в эксперименте были использованы этиловый спирт в концентрации 40 %, 70 %, 96 %.

Указанный в примечании показатель (максимально испытуемая концентрация) означает степень разведения исследуемых лекарственных

препаратов, т.е.

Таблица 25

Антимикробные свойства препаратов полыни эстрагон (мг/мл)

Примечание: максимально испытуемая концентрация составила 100 мг/мл; * - исследования в отношении данного микроорганизма не проводились.

Результаты эксперимента показали, что наибольшей активностью обладает настойка полыни эстрагон на 96 % этиловом спирте, активная грамотрицательных бактерий (дизентерийная палочка Флекснера) в концентрации 100 мг/мл, грамоположительных (золотистый стафилококк, картофельная палочка) в концентрации 50 мг/мл и актиномицетов в концентрации 50 мг/мл. Настойка, полученная на 70 % этиловом спирте активна в отношении грамоположительных бактерий (золотистый стафилококк, картофельная палочка) в концентрации 50 мг/мл и в

отношении актиномицетов в концентрации 50 мг/мл. Настойка, полученная на 40 % этиловом спирте проявила антимикробную активность только в отношении грамоположительных бактерий (золотистый стафилококк, картофельная палочка), в концентрации 100 мг/мл.

Установлено, что настой полыни эстрагон в максимально испытуемой концентрации (100 мг/мл) проявил антимикробную активность в отношении золотистого стафилококка в концентрации 100 мг/мл, что свидетельствует о перспективности использования данной лекарственной формы как для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (особенно в случае дисбактериозов), так и для наружного применения при лечении стафилококковой инфекции.

С учетом результатов исследований проведено дополнительное изучение антистафилококковой активности настоя полыни эстрагон.

В пробирку с пятью мл настоя полыни эстрагон вносилось 500 тысяч микробных клеток золотистого стафилококка, после чего тотчас (контроль), через 1, 2,4, 8 и 24 часа делались высевы на питательный агар по секторам.

По сравнению с контролем постепенно уменьшалось количество высеваемой культуры. Через 24 часа живых микробных клеток в настое отмечено не было.

По результатам исследований, представленных в табл. 25, установлено, что 70 % и 96 % этиловый спирт угнетает рост дизентерийной палочки Флекснера в концентрации 100 мг/мл и 50 мг/мл соответственно, что необходимо учитывать при испытаниях спиртовых настоек. Рост других микроорганизмов в максимально испытуемой концентрации не угнетается.

Полученные данные свидетельствуют о вкладе БАВ травы полыни эстрагон в антимикробную активность препаратов на ее основе.

С точки зрения механизма действия антимикробной активности 70 % этилового спирта [7], можно утверждать, что применение 70 % настойки полыни эстрагон позволит:

1) минимизировать содержание концентрации этилового спирта в лекарственном препарате с сохранением его бактериостатической активности;

2) исключить перекисное воздействие лекарственного препарата на клетку живого организма;

3) проявить антимикробную и регенерирующую активность за счет содержания в препарате таких групп биологически активных веществ, как флавоноиды, каротиноиды, терпеноиды (эфирное масло).

Исходя из результатов проведенных микробиологических исследований, представляется необходимым провести дополнительное исследование антимикробной активности 70 % настойки полыни эстрагон, как наиболее оптимальной лекарственной формы с точки зрения стабильности препарата, его способности подавлять рост микроорганизмов, а также возможности минимизации концентрации этилового спирта в лекарственном препарате. Результаты эксперимента представлены в табл. 26.

Таблица 26

Антимикробные свойства настойки полыни эстрагон (мкг/мл)

Примечание: максимально испытуемая концентрация составила 20000 мкг/мл.

По результатам данных исследований настойка полыни эстрагон активна в отношении грамположительных бактерий (палочка Антракоида) в концентрации 2500 мкг/мл, и в отношении золотистого стафилококка в концентрации 5000 мкг/мл.

5.5.2. Изучение противогрибковой активности препаратов полыни эстрагон.

В ходе данных исследований давалась качественная и количественная оценка противогрибковой активности препаратов полыни эстрагон. В качестве препарата сравнения использовали известное антибактериальное лекарственное средство растительного происхождения - настойку эвкалипта. Для качественной оценки препаратов использовали метод бумажных дисков, для количественной оценки - метод серийных разведений.

Изучение антигрибковой активности препаратов полыни эстрагон

методом бумажных дисков

Для определения зоны задержки роста использовался такой вид дерматофитов, как трихофитон красный, а также такой вид грибов рода Candida, как Candida albicans. Результаты исследования препаратов методом бумажных дисков показали, что настойка полыни эстрагон проявляет антигрибковую активность в отношении трихофитона красного (зона задержки роста 2,5 мм) и гриба Candida (зона задержки роста 1,5 мм). Настойка эвкалипта проявила антигрибковую активность в отношении гриба Candida (зона задержки роста 1,0 мм). Результаты эксперимента представлены в таблице 27.

Таблица 27

полыни эстрагон

Сравнительная антигрибковая активность препаратов

Изучение антигрибковой активности препаратов полыни эстрагон

методом серийных разведений

Для количественной оценки препаратов для титрования фунгистатических доз препаратов полыни эстрагон использовались такие виды дерматофитов (по два штамма), как трихофитон красный и микроспорон канис, а также такой вид грибов рода Candida, как Candida albicans (табл. 28).

Для этого делались разведения препаратов, кратные двум расплавленной и остуженной средой Сабуро. Разведенные таким образом препараты заливались в чашки Петри и оставлялись до застывания, после чего по секторам засевалась взвесь грибов. Посевы инкубировались в термостате при t = 29 °С. Активность в отношении грибов рода Candida учитывалась через двое суток, а в отношении дерматофитов - через 5 суток. Максимально испытуемая концентрация препаратов составила 1000 мкг/мл. Результаты эксперимента представлены в табл. 28.

Таблица 28

Сранительная противогрибковая активность препаратов полыни эстрагон

Примечание: максимально испытуемая концентрация составила 10000 мкг/мл.

В данных условиях настойка полыни эстрагон обладала фунгистатическим действием в отношении микроспорона в концентрации 10000 мкг/мл, в отношении трихофитона - 5000 мкг/мл (табл. 28). Настойка эвкалипта проявила антигрибковую активность в отношении трихофитона в концентрации 10000 мкг/мл. По результатам количественной оценки антигрибковой активности препаратов, настойка полыни эстрагон проявляет более высокое (в 2 раза) фунгистатическое действие в отношении трихофитона (5000 мкг/мл), чем препарат сравнения - настойка полыни эстрагон (10000 мкг/мл) (табл. 28).

Таким образом, в результате проведенных микробиологических исследований выявлена противомикробная активность у препаратов - настоя и настойки полыни эстрагон, а также противогрибковая активность у настойки полыни эстрагон. Полученные данные свидетельствует о перспективах применения препаратов полыни эстрагон в качестве антибактериального, противовоспалительного средства в медицинской практике и возможности изучения клинического применения разрабатываемых лекарственных средств.

5.5.3. Изучение острой токсичности препаратов полыни эстрагон

Изучена острая токсичность препаратов на 20 белых лабораторных

мышах, путем внутрибрюшинного введения настойки и настоя полыни эстрагон. Исследования показали, что препараты не обладают токсичностью при энтеральном и парентеральном введении в концентрации 0,5 и 0,15 г/кг соответственно [77].

Следовательно, изучаемое растение и исследуемый лекарственный препараты на его основе - настой, настойка полыни эстрагон относятся к группе малотоксичных веществ. Литературные данные фармакологических исследований также свидетельствуют о безопасности препаратов полыни эстрагон [173].

5.5.4. Опыт клинических наблюдений применения настоя полыни эстрагон

Накоплен некоторый опыт клинического наблюдения использования настоя полыни эстрагон в медицинской практике.

Исследования проводились в хирургическом отделении городской поликлиники № 4 Кировского района г. Самары в период с 01.11.2003 по 25.12.2003 г.

Разрабатываемый препарат - настой полыни эстрагон применяли для промывания гнойных ран, а также в виде влажно-высыхающих повязок при лечении больных-добровольцев с различной хирургической патологией. В качестве препарата сравнения использовали 0,02 % раствор фурацилина. Местное лечение настоем полыни эстрагон сочетали с антибактериальной терапией (гентамицин, ампициллин), обезболивающими препаратами (анальгин, кеторол, промедол), антигистаминными препаратами (димедрол) и витаминами. Данные наблюдения проведены на 17 пациентах-добровольцах, из них - 7 мужчин и 10 женщин в возрасте от 28 лет до 71 года. Сроки лечения больных составили от 2 до 40 суток непрерывного применения препарата. В случае

нагноения послеоперационной раны после аппендэктомии заживление раны при применении настоя полыни эстрагон происходило в течение 12- 13 дней (в контроле в течение 14 дней). При абсцессе подкожной клетчатки (вскрытие гнойника) затягивание раны наступило на 8 - 9 день (в контроле на 10 -12 день). В случае вскрытия подкожного панариция при применении настоя полыни эстрагон заживление раны наступило на 6 - 7 день (в контроле на 9-й день).

Таким образом, при использовании настоя полыни эстрагон очищение и заживление раны происходило в среднем на 2 суток раньше, чем в случае применения 0,02 % раствора фурацилина.

Опыт применения настоя полыни эстрагон для профилактики и лечения послеоперационных гнойных осложнений у больных хирургического отделения № 7 Самарской городской Ордена "Знак Почета" клинической больницы № 1 им. Н.И. Пирогова в период с 01.09.2000 г. по 15.04.2001 г. подтверждают результаты наблюдений [77, 78, 151].

5.5.5. Фармакоэкономическое обоснование целесообразности применения препаратов полыни эстрагон в медицинской практике

В связи с разработкой проекта ФС на новый вид ЛРС ’Полыни эстрагон трава” и ФСП на новое лекарственное средство “Полыни эстрагон настойка” возникли вопросы относительно широкого производства препарата, методики ценообразования, его распределения и сбыта на современном фармацевтическом рынке Самарской области, а также вопросы конкурентоспособности предлагаемого препарата на фоне применяемых отечественных и импортных ЛС.

Проведенные нами маркетинговые исследования антимикробных лекарственных средств, позволили изучить их номенклатуру и определить положение препаратов на современном фармацевтическом рынке

Самарской области [94, 125-129, 147-150]. В результате анализа

ассортимента антимикробных лекарственных средств было выявлено процентное соотношение лекарственных препаратов в зависимости от источника его получения (рис. 36). Лекарственные препараты синтетического происхождения составили 81 %, комбинированные - 8 %, лекарственные средства растительного происхождения составили всего 11 %. Между тем, известно, что препараты растительного происхождения имеют целый ряд незаменимых достоинств, в частности, широту терапевтического действия.

Таким образом, расширение ассортимента антимикробных препаратов растительного происхождения является, на наш взгляд, актуальной задачей.

В настоящее время в условиях ограниченного бюджетного финансирования вопрос рационального выбора и назначения лекарственных препаратов рассматривается в качестве приоритетного. В

связи с данным обстоятельством разрабатываемый препарат полыни эстрагон обязан отвечать всем современным требованиям фармакоэкономики [39]. Анализ ценовых характеристик разрабатываемого препарата “Полыни эстрагон настойка” позволил рассчитать цену за единицу продукции настойки полыни эстрагон. С учетом явлений инфляции цена за единицу продукции препарата “Полыни эстрагон настойка” на сегодняшний день составляет порядка 5 руб. Однако, в связи с переходом отечественных фармацевтических предприятий на работу в соответствии со стандартами GMP, можно прогнозировать увеличение цены за единицу продукции настойки полыни эстрагон.

Таким образом, выявлено, что предлагаемый препарат полыни эстрагон отвечает требованиям фармакоэкономики в плане эффективности, безопасности и себестоимости курса лечения [39]. Кроме того, внедрение в медицинскую практику нового антимикробного препарата позволит открыть новые возможности в решении проблемы лекарственного обеспечения населения и Л11У Самарской области, а также Российской Федерации в целом.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о возможностях применения настойки полыни эстрагон в качестве антимикробного и регенерирующего лекарственного средства в медицинской практике. Полученные данные фитохимических, аналитических и фармакологических исследований целесообразно использовать в целях разработки нормативной документации (проект ФСП) на новое лекарственное средство “Полыни эстрагон настойка”.

Выводы к главе 5

1. Разработана методика качественного анализа препаратов полыни эстрагон методом тонкослойной хроматографии (ТСХ), позволяющая обнаруживать диагностические химические признаки настоя и настойки: два доминирующих флавоноида - эстрагонозид (1) в виде желтого пятна с Rf = 0,48 и пиноцембрин (4) в виде ярко-оранжевого пятна cRf=0,9.

2. Разработана методика количественного анализа настойки полыни эстрагон методом дифференциальной спектрофотометрии. В качестве аналитической длины волны может быть использован максимум поглощения при 404 нм, обусловленный комплексом эстрагонозида и других флавоноидов с А1С1з.

3. Результаты количественной оценки содержания суммы флавоноидов в пяти различных образцах сырья показал, что качестве нижнего предела можно рекомендовать показатель 1 % в пересчете на рутин.

4. Установлено, что относительная ошибка метода дифференциальной спектрофотометрии находится в пределах ошибки единичного определения разработанных методик, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки данных методик.

5. Разработанные методики качественного (ТСХ-анализ), количественного анализа (дифференциальная спектрофотометрия) настойки полыни эстрагон рекомендованы для включения в проект фармакопейной статьи (ФСП) на новое лекарственное средство “Полыни эстрагон настойка”.

6. Метод ТСХ-анализа позволяет обнаружить основной компонент эфирного масла полыни эстрагон -метилэвгенол.

7. Изучена возможность использования метода ГЖХ для идентификации (качественной оценки) основного компонента эфирного масла полыни эстрагон - метилэвгенола.

8. В результате проведенных микробиологических исследований выявлена противомикробная активность у препаратов - настоя и настойки полыни эстрагон, а также противогрибковая активность у настойки полыни эстрагон.

9. Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать настойку полыни эстрагон в качестве антимикробного и регенерирующего лекарственного средства для применения в медицинской практике.

10. Полученные данные фотохимических, аналитических, аналитических, технологических, микробиологических исследований включены в проект ФСП на новое лекарственное средство “Полыни эстрагон настойка”.