Применение FISH-реакции при отдельных опухолевых заболеваниях у детей

Хронический миелолейкоз (XMJI). Это первое опухолевое злока­чественное заболевание человека, связь которого с цитогенетическим на­

рушением была доказана убедительно. В I960 г.

Эту реакцию можно ставить на мазках крови, на пунктатах костного мозга и даже (редко) на срезах. Поиски можно вести как на интерфазных ядрах, так и метафазных пластинках. Обычно в лабораторию доставляют пунктаты костного мозга.

Nmyc (MYCN). Nmyc является представителем семейства генов тус (myelocytomatosis viral related oncogene) и кодирует локализующийся в ядре белок, относящийся к транскрипционному фактору. Находится этот ген на коротком плече второй хромосомы (2p24.1).

Особое значение он приобрел после того, как в работах М. Schwab’a,

H. Е. Warmus’a и J.M. Bishop’a была выявлена роль продукта этого гена в про­гнозе нейробластомы. Ген MYCN амплифицирован примерно в 20-25% нейробластом, чаще на поздних стадиях, и является прогностически не­благоприятным фактором, обусловливающим химиорезистентность опу­холевых клеток.

До сих пор нет четких количественных параметров для оценки степе­ни амплификации гена Nmyc. Вначале выделяли амплификацию низкой и высокой степени, принимая за амплификацию наличие даже трех лишних копий гена. В настоящее время склоняются к числу 10 (при 2 центромер­ных сигналах), но, на наш взгляд, в амплифицированном состоянии сиг­налов должно быть еще больше.

Небольшое число копий гена Nmyc может быть не связано с амплифика­цией этого гена. Во-первых, иногда формируются изохромосомы 2р, а во- вторых, происходят несбалансированные транслокации короткого плеча второй хромосомы.

Несколько моментов, которые должны быть учтены специалистом, про­водящим FISH-реакцию при нейробластоме.

I. Ганглионейрома не сопровождается амплификацией гена Nmyc, поэто­му не является объектом изучения, хотя некоторые клиницисты по не­знанию настаивают на этом.

2. Очень осторожно надо оценивать результаты исследования ганглио- нейробластомы. Микроскопическая структура этого варианта чрез­вычайно пестрая и требует детального изучения каждого случая на препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином. Регистрировать сигналы следует в мелких округлых ядрах незрелых клеток. Более круп­ные клетки, созревающие в ганглиоциты, проходят стадию полиплои- дизации и без строгого учета числа центромерных сигналов могут быть ошибочно расценены как клеточные элементы с амплификацией гена Nmyc.

3. В случае динамического наблюдения за больными желательно прове­сти FISH-реакцию на материале, полученном на разных этапах лечения пациента — рецидивах, метастазах. Анализ состояния гена Nmyc в ди­намике позволяет более объективно оценить прогностическое значе­ние этого фактора, что, самое главное, должно производиться в контек­сте всей микроскопической картины болезни на конкретном ее этапе. Имеются наблюдения, когда различалось число копий гена Nmyc в ре­цидивных опухолях и метастазах по сравнению с первичным очагом болезни.

В клиническом аспекте следует также помнить, что не всегда степень ампли­фикации (вплоть до ее отсутствия) коррелирует с прогнозом. Во многом та­кие расхождения обусловлены степенью экспрессии гена на уровне PHK или белка.

Для установления прогноза при нейробластоме используется и другая реакция, выявляющая делецию короткого плеча 1-й хромосомы (1р36). Ре­зультат этой делеции прогностически весьма неблагоприятен, поскольку предположительно связан с потерей пока не идентифицированного гена-су- прессора, локализующегося в этом участке.

На тканевых срезах результаты не очень демонстративны (нужно сосчи­тать большое число не перекрывающих друг друга ядер). В тех случаях, когда это возможно, лучше проводить реакцию на мазках-отпечатках. Особое зна­чение придают результатам этой реакции для предсказания рецидивов опу­холи.

Проба на увеличение числа копий 17q, также характерного для нейробла­стомы, на практике применяется редко.