Тестирование по задаче

1. Лизирующий буфер для гомогенизации ткани с целью последующего выделения РНК содержит:

а) гуанидин изотиоцианат;

б) изопропанол;

в) этанол;

г) 12М LiCl.

2. Опасность деградации РНК при выделении из ткани связана в первую очередь с:

а) химической неустойчивостью молекул РНК;

б) наличием в ткани эндогенных РНКаз;

в) возможной контаминацией РНКазами лизирующего буфера для выделения РНК ;

г) возможной контаминацией РНКазами реактивов для ПЦР.

3. Синтез первой цепи кДНК осуществляется с помощью фермента:

а) РНК лигаза;

б) ДНК полимераза;

в) РНК полимераза;

г) обратная транскриптаза.

4. Для синтеза первой цепи тотальной кДНК в качестве затравки используется:

а) олигонуклеотид, содержащий поли(ЭТ) последовательность на 3'- конце;

б) олигонуклеотид, содержащий поли(Л') последовательность на 5'- конце;

в) олигонуклеотид, содержащий поли^С) последовательность на 3'- конце;

г) олигонуклеотид, содержащий поли^С) последовательность на 5'- конце.

5. Нуклеотидная последовательность 3'-конца первой цепи кДНК, синтезированной с помощью набора MINT:

а) идентична нуклеотидной последовательности PlugOligo;

б) комплементарна нуклеотидной последовательности PlugOligo;

в) идентична нуклеотидной последовательности 3' праймера, использовавшегося в качестве затравки;

г) комплементарна нуклеотидной последовательности 3' праймера, использовавшегося в качестве затравки.

6. При синтезе кДНК с помощью набора MINT олигонуклеотид PlugOligo играет роль:

а) затравки для синтеза первой цепи кДНК;

б) затравки для синтеза второй цепи кДНК;

в) матрицы для синтеза первой цепи кДНК;

г) матрицы для синтеза второй цепи кДНК.

7. Повышение точности синтеза ДНК в процессе ПЦР достигается за счёт:

а) увеличения продолжительности этапа отжига праймеров;

б) увеличения продолжительности этапа элонгации;

в) использования ДНК полимераз, обладающих 3'-5'

экзонуклеазной активностью;

г) использования ДНК полимераз, не обладающих 3'-5' экзонуклеазной активностью.

8. Эффект селективной супрессии ПЦР достигается за счёт:

а) добавления химических ингибиторов полимеразы;

б) наличия взаимно комплементарных участков на 3' и 5' концах матричной ДНК;

в) уменьшения продолжительности этапа элонгации;

г) наличия GC-богатых участков в составе матричной ДНК.

9. Расчётная температура отжига для одного праймера равна 50°С, а для другого 60°С. Какая температура отжига должна использоваться в ПЦР с участием обоих праймеров:

а) 50°С;

б) 55°С;

в) 60°С;

г) эти праймеры нельзя использовать вместе.

10. Расчётная температура отжига праймера

ACCTGGTGTTAAGATTA равна:

а) 40-45°С;

б) 46-51°С;

в) 52-57°С;

г) 58-63°С.

11. Для клонирования неизвестного гена на основе информации об уже известных гомологичных генах необходимо знать:

нуклеотидов.

12. Использование Step-Out праймеров позволяет:

а) получать максимально длинные фрагменты при амплификации 5'- и 3'-концов кДНК;

б) уменьшить количество циклов ПЦР за счет использования трёх праймеров вместо двух;

в) избавиться от фоновой амплификации неспецифичного продукта ПЦР с одного праймера за счёт увеличения длины амплифицируемого фрагмента;

г) избавиться от фоновой амплификации неспецифичного продукта ПЦР с одного праймера за счёт эффекта селективной супрессии ПЦР.

13. При проведении 5' RACE вы получили несколько продуктов ПЦР разной длины. Это может объясняться:

а) наличием нескольких сплайс-вариантов для исследуемого гена;

б) частичной деградацией РНК, использовавшейся для синтеза кДНК;

в) случайными обрывами синтеза первой цепи кДНК;

г) случайными обрывами синтеза второй цепи кДНК.

14. Для амплификации тотальной кДНК в 50 мкл реакционной смеси вам потребовалось провести 20 циклов ПЦР. Качеством получившейся амплифицированной кДНК вы удовлетворены. Теперь вам необходимо получить в 10 раз больше кДНК. Следует:

а) провести ПЦР в 50 мкл реакционной смеси, взяв на старт в 10 раз больше матрицы;

б) провести ПЦР в 50 мкл реакционной смеси, увеличив количество циклов на 3;

в) провести ПЦР в 50 мкл реакционной смеси, увеличив количество циклов на 10;

г) провести 10 реакций, идентичных исходной ПЦР.

15. В результате ПЦР кДНК с вырожденных праймеров вы получили несколько хорошо различимых на электрофорезе амплифицированных фрагментов ДНК. Вы считаете, что один из этих фрагментов соответствует участку гена, который вы собираетесь клонировать. При постановке nested ПЦР вы разбавили исходную реакционную смесь в 50 раз и взяли 1 мкл получившегося раствора на 20 мкл новой реакции в качестве матрицы. Если ваше предположение верно, сколько циклов ПЦР потребуется, чтобы амплифицировать нужный фрагмент ДНК до той же концентрации, что была у исходных фрагментов:

а) около 10 циклов;

б) около 20 циклов;

в) около 30 циклов;

г) около 40 циклов.

16. Для последующего клонирования продукта ПЦР вам необходимо ввести в нуклеотидные последовательности праймеров адаптерные участки, содержащие сайты узнавания эндонуклеазами рестрикции. Какой участок каждого праймера должен содержать данные адаптеры:

а) 3'-конец 3'-праймера и 5'-конец 5'-праймера;

б) 3'-конец 3'-праймера и 3'-конец 5'-праймера;

в) 5'-конец 3'-праймера и 5'-конец 5'-праймера;

г) 5'-конец 3'-праймера и 3'-конец 5'-праймера.

17. Ген флуоресцентного белка коралла был клонирован в вектор pQE30 для экспрессии в E. coli. Экспрессируемый бактериями белок по своему аминокислотному составу:

а) полностью идентичен исходному белку из коралла;

б) содержит дополнительные аминокислоты на N-конце;

в) содержит дополнительные аминокислоты на C-конце;

г) содержит сайты узнавания эндонуклеазами рестрикции.

18. Ампициллин, добавляемый в культуральную среду для роста E. coli, необходим в первую очередь для:

а) предотвращения роста других бактерий (не E.coli);

б) предотвращения роста нетрансформированных бактерий

E.coli;

в) предотвращения роста бактерий E.coli,

трансформированных вектором, не содержащим вставки;

г) повышения уровня экспрессии белка.