Бактериологическая диагностика отделяемого цервикального канала

Материал забирался из цервикального канала и влагалища на транспортные среды для индикации микоплазм. Взятие биоматериала проводилось при помощи стерильного специального зонда из цервикального канала на жидкую транспортную питательную среду, содержащую все необходимые питательные вещества для сохранения МИ и ингибирующей рост посторонней флоры за счет содержащихся в среде антибиотиков и антимикотиков.

Доставка в лабораторию осуществлялась в сроки, составляющие не более 5 часов с момента взятия материала. Полностью автоматизированная система VITEK 2 (Biomerieux, Франция) разрабатывалась в первую очередь для идентификации и чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Прибор имеет модульное строение и может содержать для инкубации на 60, 120 или 240 позиций. Прибор состоит из 2 блоков: устройство для заполнения и устройство для запаивания карт; инкубатор и ридер. Прибор управляется компьютером со специальной программой. Карты для идентификации возбудителей содержат 30 лунок с лиофилизированными биохимическими субстратами и необходимыми реагентами. Карты для определения чувствительности к антибиотикам состоят из 45 лунок, заполненных антибиотиками различной концентрации. Время идентификации и определения чувствительности к антибиотикам большинства микроорганизмов не превышает 4-6 часов. Прибор VITEK 2 вмещает до 60 карт одновременно, удаление карт происходит автоматически. В данном случае используется флуоресцентный индикатор, в случае ферментативных тестов используется меченый субстрат. За счет этого время анализа сокращается до 1,5 часов.

По данным микробиологического исследования на биоценоз влагалища осуществлялась оценка влагалищного мазка, определялись «морфотипы» следующих микроорганизмов: Lactobacillus, морфотип Gardnerella vaginalis, Bacteroides и Mobiluncus, Fusobacterium, Leptotrix, Veilonella, Candida, грамположительные кокки, колиформные палочки.

• 1 степень (компенсированный) - отсутствие в исследуемом материале биоты при неизмененных эпителиоцитах;

• 2 степень (субкомпенсированный) - количественное снижение лактобацилл, увеличение количества грамвариабельной полиморфной бактериальной биоты, появление единичных ключевых клеток (1-5);

• 3 степень (декомпенсированный) - полное отсутствие лактобацилл, «ключевые клетки» более 20% в поле зрения (компенсированный).

Микробиологическое исследование, предполагающее культивирование микроорганизмов, до настоящего времени является «золотым стандартом» лабораторной диагностики любого патологического процесса, вызванного микроорганизмами, в том числе и условно-патогенными. В настоящее время выделяют следующие требования к бактериологическому анализу: снижение субъективного фактора, сокращение времени получения результата, снижение трудозатрат при выполнении возросшего объема анализов, объективизация чтения результата, создание оптимальных схем химиотерапии. Рациональным решением поставленных задач является применение автоматизированных анализаторов. Для идентификации бактерий применялась новая система - анализатор бактериалогический Vitek MS (Biomtrieux, Франция). Для идентификации бактерий определяется спектр белков напрямую из бактериальной клетки без предварительной длительной пробоподготовки. Для каждого вида микроорганизмов сформирован характерный набор белков (биомаркеров), полученный на основе анализа не менее 50 масс-спектров этого вида. При этом образцы

получены из различных источников (больниц, лабораторий,

микробиологических коллекций), а каждый образец тщательно идентифицирован с помощью сиквенса 16s РНК или других

сертифицированных методов анализа. Структурированная таким образом база данных позволяет быстро и точно идентифицировать микробиологические штаммы.

Постановка теста на чувствительность к антибиотикам проводилась только в случае выявления уреаплазм в большом титре (10⁴ и более ЦОЕ/мл), что являлось основанием для последующей антибиотикотерапии.

Бактериологический метод имеет ряд недостатков. Условно-патогенная флора, являющаяся причиной ряда патологических процессов в организме, к которой относится МИ, в основном, состоит из анаэробных

микроорганизмов, для культивирования которых требуются высококачественные селективные питательные среды и создание анаэробных условий. В связи с этим результат лабораторного исследования в значительной степени зависит от оснащенности бактериологической лаборатории необходимым лабораторным оборудованием и реагентами, а также от профессионализма врача-бактериолога. Недостатком метода являются также длительные сроки культивирования (в среднем 7 дней) и необходимость сохранения жизнеспособности микроорганизмов до момента поступления биоматериала в лабораторию. Кроме того, ряд этиологически значимых микроорганизмов являются труднокультивируемыми, что свидетельствует о необходимости разработки и внедрения в практическое здравоохранение новых диагностических подходов для их своевременного выявления.

2.6.