Принципы постановки непрямого метода ИФА.
Предварительно приготовленный согласно инструкции, прилагаемой к набору, исследуемый материал (сыворотка, плазма) вносится в лунку планшета. Если этого требует методика, планшет предварительно отмывается.
Несколько лунок планшета заполняют контрольными сыворотками, содержащими и не содержащими антитела к ВИЧ. При работе с контрольными сыворотками необходимо строго соблюдать инструкции по применению диагностической тест-системы, т. к. интерпретация результатов зависит от значений оптической плотности контрольных сывороток. Планшет с внесенными контрольными сыворотками и исследуемым материалом инкубируется при условиях, указанных в инструкции, прилагаемой к диагностическому набору. Если специфические антитела присутствуют в сыворотке, они образуют комплекс с антигеном, сорбированным на поверхности лунок планшета. Несвязавшиеся с антигеном антитела удаляются при отмывке планшета.Затем во все лунки планшета вносят конъюгат-антитела против иммуноглобулинов человека, меченные ферментом (пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.). При последующей инкубации происходит образование комплекса антиген — антитело — конъюгат. Несвязавшийся конъюгат удаляется во время отмывки планшета. Наиболее широко применяемым индикаторным ферментом для ИФА служит пероксидаза хрена. Субстраюм для нее служит перекись водорода.
Эта реакция протекает без видимых проявлений. Изменение окраски раствора происходит при окислении красителей (ортофени-лендиамина или др.), которые входят в состав субстратного раствора. Краситель из восстановленной формы переходит в окисленную окрашенную форму. Таким образом происходит окрашивание только тех лунок, в которых присутствует комплекс антиген — антитело — конъюгат. Иногда окрашивание может быть результатом неспецифического связывания иммуноглобулинов с антигенами ВИЧ. Учет реакции проводят на спектрофотометре (ридере) при длине волны, указанной в инструкции, прилагаемой к диагностическому набору. Длина волны зависит от красителя, используемого в тест-системе.
При постановке ИФА в случае получения положительного результата анализ проводится еще 2 раза (с той же сывороткой). При получении хотя бы еще одного положительного результата сыворотки направляют в референс-лабораторию.
Еще по теме Принципы постановки непрямого метода ИФА.:
- Непрямой иммуногистохимический метод исследования
- Сравнение информативности ТП РОГ и метода ЦДК и УЗДГ для уточнения и постановки диагноза миопии
- Непрямая офтальмоскопия.
- Непрямой массаж сердца
- III. Атрофия второго порядка, или непрямое перерождение.
- 3.2 Разработка и оценка эффективности тест-систем НРИФ и ИФА для определения антигенов P. carinii и антител классов IgG и IgM.
- 3.3 Разработка и оценка эффективности тест-систем НРИФ и ИФА для определения антигенов ЦМВ и антител классов IgM и IgG
- 1.1. Принцип метода метилчувствительной ПЦР со статистическими GC- богатыми праймерами.
- Постановка задач
- Общие принципы и методы лечения генитального хламидиоза
- Современные принципы и методы лечения акне и коррекции дисплазии соединительной ткани