2.5 Методология оценки чувствительности возбудителей онихомикоза к антимикотическим препаратам
Для определения чувствительности возбудителей онихомикоза к антимикотическим препаратам использовали 2 метода (диско-диффузионный метод и серийных разведений).
Определение чувствительности дрожжей к флуконазолу проводили диско- диффузионным методом CLSI М-44A [73].
При этом использовали диски, содержащие 25 мкг флуконазола, модифицированный агар Мюллера-Хинтон. Длительность инкубации составляла 18-24 часа, при температуре 350С. Учет результатов определения чувствительности штаммов дрожжей к флуконазолу проводили, измеряя диаметр зон подавления роста на микробиологическом анализаторе BIOMIC Vision [5]. Критерии интерпретации результатов представлены в таблице 3.Таблица 3 – Критерии интерпретации результатов определения чувствительности
дрожжей - возбудителей онихомикоза.
| Антимикотический препарат | Концентрация в диске (мкг) | Диаметр зоны отсутствия роста грибов (мм) | ****МПК (мкг/мл) | ||||
| У* | У/Ч** | Ч*** | У* | У/Ч** | Ч*** | ||
| Флуконазол | 25 | ≤14 | 15-18 | ≥19 | ≥64 | 16-32 | ≤8 |
Примечание: У* – устойчивые штаммы, У/Ч** – штаммы с дозозависимой
чувствительностью, Ч*** – чувствительные штаммы, МПК**** – минимальная подавляющая концентрация (МПК): наименьшая концентрация, которая при
определенных условиях in vitro, предотвращает видимый рост грибов в пределах определенного времени.
Для определения чувствительности нитчатых грибов к тербинафину и итраконазолу использовали метод последовательных разведений в жидкой среде Сабуро [22].
Культуры выращивали в течение 2-х недель, затем готовили рабочую взвесь из зрелых культур в физиологическом растворе густотой 5 Ед по стандарту мутности. Количество вносимой рабочей взвеси в каждую пробирку ряда составляло 0,1 мл. В каждом опыте ставили 3 контроля: 1) культуры (1 мл питательной среды + 0,1 мл рабочей взвеси культуры (без антимикотика);
2)питательной среды (1 мл среды, без культуры и антимикотика);3)антимикотика
(0,9 мл питательной среды + 0,1 мл исходного разведения антимикотика, то есть
100 мкг действующего вещества-субстанции).
Все ряды подготовленных разведений с культурами и контрольные пробирки выдерживали при температуре 370С или 280С (в зависимости от вида и штамма) до появления роста гриба в первом контроле.
Минимальной подавляющей концентрацией (МПК) антимикотика считали разведение в той пробирке, в которой визуально отсутствует рост микромицета.
Определение чувствительности дрожжей и нитчатых недерматомицетов к антимикотикам выполнено Выборновой И.В., научным сотрудником НИЛ микологического мониторинга и биологии грибов НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И.И. Мечникова Минздрава России.
Еще по теме 2.5 Методология оценки чувствительности возбудителей онихомикоза к антимикотическим препаратам:
- 3.8 Изучение in vitro чувствительности недерматомицетов к антимикотическим препаратам
- 1.6 Чувствительность микромицетов – возбудителей онихомикоза in vitro
- 1.4 Чувствительность возбудителей инвазивного кандидоза к противогрибковым препаратам
- 4.1 Результаты определения чувствительности возбудителей инвазивного кандидоза методом CLSI M27-A3.
- 3.13 Оценка эффективности комплексного лечения онихомикоза стоп и кистей
- 4.2 Результаты определения чувствительности возбудителей инвазивного кандидоза методом CLSI M44 - A
- 4.3 Результаты определения чувствительности возбудителей инвазивного кандидоза с помощью анализатора Vitek2 Compact
- 2.7 Методы определения чувствительности Candida spp. к противогрибковым препаратам in vitro
- Чувствительность выделенной микрофлоры к антибактериальным препаратам
- Определение чувствительности к антимикробным препаратам
- 1.5 Современные методы определения чувствительности Candida spp. к противогрибковым препаратам
- 5.5 Чувствительность штаммов C.neoformans разной вирулентности к азоловым препаратам и антимикробным пептидам животного происхождения