2.4 Микологическое исследование

Микологическое исследование включало прямую микроскопию патологического материала и посев образцов, в которых были обнаружены элементы грибов, а также определение чувствительности возбудителей к антимикотическим препаратам.

Мы использовали диагностические критерии онихомикоза, обусловленного недерматомицетами, рекомендованные международными экспертами (Gupta,

2011): 1) положительный результат микроскопического исследования с КОН; 2) выделение культуры микромицета; 3) повторное выделение культуры при повторном заборе биоматериала, либо высев одного и того же вида гриба в 5 из 20 точек посева; 4) отсутствие роста дерматомицета.

Для одного пациента выполнено гистологическое исследование. Микроскопию соскобов с ногтевых пластинок проводили с использованием

30% раствора КОН. Подготовленные препараты просматривали в световом микроскопе при увеличениях 100х и 400х. Для лучшей визуализации характерных грибных структур (гифы гриба, артроспоры, дрожжевые почкующиеся клетки, псевдомицелий), добавляли в препараты флюорохром – калькофлюор белый и просматривали препарат в люминесцентном микроскопе [1].

Для первичной изоляции грибов использовали агаризованную среду Сабуро с 2% глюкозы, содержащую антибиотик (40 мг/л левомицетина). Посевы инкубировали при температуре +280С в течение 2-4 недель. При отсутствии роста в течение 30 дней результаты культивирования считали отрицательными. При появлении роста в первичном посеве проводился отсев колонии на свежую дифференциальную среду для получения чистой культуры, которая служила материалом для идентификации выделенного микромицета. Полученный при

посеве дерматомицет считали истинным возбудителем онихомикоза. Культуры нитчатых грибов идентифицировали до вида по макро- и микроморфологическим признакам, согласно определителю грибов. Видовая идентификация дрожжей включала тест на «ростковые» трубки, биохимические тесты с использованием коммерческой тест-системы «Auxacolor 2» (BioRad, США) [1].