Вирусная инфекция ЭК в культуре
Эндотелиальные клетки аорты и пупочной вены человека выделяли и культивировали до состояния монослоя, как описано выше. Конфлузнтные культуры отмывали раствором Эрла, снимали трипсином-ЭДТА и рассаживали в 24- или 48- ячеечные культуральные планшеты с разведением 1:2.
В экспериментах по изучению особенностей репродукции вируса в отдельных клеточных популяциях использовали приемы получения дискретных колоний ЭК, описанные в соответствующих разделах. В дальнейшем, с этими культурами работали так же, как с остальными.На 3-4 сутки после посадки клетки инфицировали вирусом простого герпеса 1 типа (ВПГ-1, линия R39) при множественности инфекции (МИ) от 0.1 до 0.0001. Через 1 час инкубации при +37°С культуры отмывали раствором Эрла и/или средой культивирования и заменяли среду на свежую. Морфологические изменения клеток контролировали с помощью фазово-контрастной микроскопии. Титрование вируса в образцах культуральной среды проводили стандартным методом предельных разведений на чувствительной культуре клеток линии Vero.
Определение ИФН-альфа проводили на культуре диплоидных фибробластов человека стандартным методом предельного разведения [Scheglovitova et al., 2000]. Концентрации в культуральной среде ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8 и TNF-a измеряли иммуноферментным методом с использованием наборов "Цитокин", (Протеиновый контур, Санкт-Петербург) и "Cytelisa" (США) в случае ИФН-гамма.
Для активации клеток крови, полученных методом градиентного центрифугирования (см. выше) использовали прием, предложенный Capobianchi et al. [1985]. Культуры контрольных и инфицированных ВПГ-1 ЭК, отмывали раствором Эрла и фиксировали 0.1 % раствором глутарового альдегида на ФБД в течение 30 минут. После серии отмывок ФБД и средой культивирования, к фиксированным ЭК добавляли суспензию лейкоцитов периферической крови и инкубировали в течение 24-48 часов. Супернатанты центрифугировали и использовали для анализа спектра секретируемых цитокинов или для добавления к культивируемым (инфицированным или контрольным) ЭК.
6.
Еще по теме Вирусная инфекция ЭК в культуре:
- Острые респираторные вирусные инфекции
- Вирусные гепатиты у больных туберкулезом и ВИЧ — инфекцией.
- Острые респираторные вирусные инфекции.
- 1.2 Эпидемиология респираторно-синцитиальной вирусной инфекции
- Вирусная инфекция эндотелия
- Динамика госпитализации пациентов с острыми респираторными вирусными инфекциями
- 3 Вирусные инфекции
- Факторы риска в формировании сочетанных вирусных гепатитов с ВИЧ-инфекцией
- 1.1 Этиологическая структура острых респираторных вирусных инфекций
- 5.2 Маркеры перенесенной респираторно-синцитиальной вирусной инфекции
- 5.1 Диагностика острой респираторно-синцитиальной вирусной инфекции
- Эпидемиология вирусных гепатитов у больных ВИЧ - инфекцией.
- Особенности развития вирусной инфекции сосудистой стенки.
- Динамика заболеваемости сочетанными формами ВИЧ-инфекции с парентеральными вирусными гепатитами за период 1997-2012 гг.
- Грипп и другие острые респираторные вирусные инфекции
- Этиологическая структура острых респираторных вирусных инфекций
- Эпидемиология туберкулеза, ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов в Хошимине и Санкт- Петербурге.
- Дизайн клинического когортного пилотного исследования подростков, частоболеющих острой респираторно-вирусной инфекцией.