СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВ (два занятия)

Цель занятий. Ознакомление студентов е основными мето­дами лабораторного исследования крови, спермы, волос как вещественных доказательств.

Занятие первое

Судебно-медицинское исследование крови

(проводится в учебной комнате)

План работы

1.

2. Установление видовой принадлежности крови в пятнах. Прове­дение реакции преципитации Чнстовнча—Уленгута.

3. Определение групп системы MN (типов) в жидкой крови.

4. Установление группы крови в пятнах (демонстрация).

Пособия к занятию. Таблицы: 1) схема наследования групповых

свойств крови; 2) схема наследования типовых свойств крови; 3) изо- герологнческне системы крови; 4) постановка и учет реакции Чистови- ча—Уленгута; 5) схема установления групп кропи в пятнах. Приборы, реактивы и другие пособия перечислены в каждом разделе.

При лабораторном исследовании крови обычно разре­шаются следующие основные вопросы:

1. Имеется ли кровь на вещественном доказательстве (наличие крови).

2. Кому она принадлежит — человеку или животному (вид крови).

3. Какова групповая и типовая принадлежность крови (возможное происхождение ее от определенного лица).

Установление наличия кровн

Для обнаружения крови на исследуемом предмете мо­гут быть применены некоторые ориентировочные методы, например исследование в ультрафиолетовых лучах. Нали­чие кровн иа исследуемом предмете доказывается путем обнаружения красящего вещества крови — гемоглобина и его производных, для чего пользуются методом спектраль­ного анализа и микрокристаллическими реакциями.

Ориентировочное исследование в ультрафиолетовых лу­чах.

Объекты исследования: вещественные доказательства с

пятнами, подозрительными на кровь Приборы н пособия- ртут­но кварцевая лампа, чашки Негрн, стеклянные палочки, ножницы, скаль­пели Реактив ы: концентрированная серная кислота

1. Веществсчшые доказательства с пятнами, подозри­тельными на кровь, освещаются в темном помещении филь­трованными ультрафиолетовыми лучами ртугпо-кварцевои лампы («Ультрасвет»). Пятна кровн в лучах ртутно-квар- певой лампы приобретают темно-коричневую окраску и бархатистый вид. Такой цвет и вид пятен объясняется тем, что кровь не флюоресцирует, а, наоборот, поглощает уль­трафиолетовые лучи. Эти явления неспецифичны, так как при исследовании в ультрафиолетовых лучах некоторых других веществ могут быть получены аналогичные резуль­таты.

2. Из подозрительных на кровь участков вырезают ку­сочки ткани или делают соскоб, помещают их на чашку Петри, добавляют несколько капель концентрированной серпом кислоты и вновь просматривают их в ультрафиоле­товых лучах. В случае наличия в исследуемом объекте кро- ьн образуется гематопорфпрпн. дающий оранжевую флюо­ресценцию. При наличии больших пятен и малой ценности предмета капля серной кислоты может быть нанесена не­посредственно на имеющийся след, подозрительный на кровь.

Спектральное исследование крови

Объекты исследования: подотригелынле на кропь пятна иа вещеегвеиных доказательствах, жидкая кропь. Приборы н по­собия: спектральные насадки АУ-16 н СПО-1, микроскоп с осветнтс- лем, спектроскоп прямого видения, химические пробирки, предметные и покровные стекла, пастеровские пипетки, стеклянные палочки, спиртов­ки, таблицы (спектры крови, шары гемохромогена). Реактивы: гид­росульфит натрия (или многосерннстый аммоний), 33% раствор едкой щелочи (КОН или NaOH), концентрированная серная кислота, дистил­лированная вода.

Исследование с помощью спектроскопа прямого видения. Если на исследуемом веществен­ном доказательстве следы, подозрительные на кровь, буду­чи свежими, растворяются в воде и имеют большие разме­ры (крупные интенсивные пятна, участки пропитывания с толстыми корочками на поверхности и т.

Вытяжку из пятна (или раствор, полученный из жид­кой крови) рассматривают через спектроскоп прямого ви­дения. В случае наличия свежей крови в спектре отмеча­ются две полосы поглощения в желто-зеленой части спект­ра между фраунгоферовымн линиями D и Е, свойственные окси гемоглобину — ОНЬ (рис. 78, см. вкл. между стр. 128—129).

При отщеплении от окенгемоглобииа кислорода можно наблюдать спектр восстановленного гемоглоби- н а (НЬ). Для этого в ту же пробирку добавляют восстано­витель (гидросульфит натрия). Вследствие перехода окенге­моглобииа в восстановленный гемоглобин вытяжка (или раствор) несколько изменяет свою окраску (сиреневый отте­нок), а спектроскопически обнаруживается одна широкая полоса поглощения восстановленного гемоглобина в желто­зеленой части спектра между фрауигоферовыми линиями D и Е.

Еспи к вытяжке (раствору), содержащей восстановлен­ный гемоглобин, добавить едкую щелочь (1—2 капли 33% КОП или NaOII), то образуется восстановленный щелочной гематин или г е м о х р о м о г е н (Her). Цвет раствора вновь изменится — станет ярко-розовым. В спектре отмечаются две полосы поглощения, свойственные гемохромогену: в жел­то-зеленой части спектра между фрауигоферовыми линия­ми D и Е — левая хорошо выраженная, а правая — рас­плывчатая, постепенно сходящая на нет к линии Ь.

Для наблюдения спектра гематопорфир и и а (Нр) в сухую химическую пробирку помещают 3—4 мл концент­рированной серной кислоты, в которую вносят осторожно по стенке пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой каплю жидкой крови.

Микроспектра л ьи ос н с с л е до в а н и е. При мнкроспектральном исследовании пятен, подозрительных на кровь, они специально обрабатываются соответствующи­ми реактивами для получения спектров гемохромогена (Нсг) и гематопорфирина (Нр); последние обладают высокой чув­ствительностью, весьма характерны и получаются не только из свежен, но н подвергшейся значительным изменениям крови.

Получение спектра гемохромогена. 1. На предметное стекло помещают измельченный соскоб или сильно разволокнениую ниточку из пятна. К ним добавляют

2— 3 капли 33% раствора едкой шелечи (КОН или NaOH) и восстановитель — гидросульфит натрия (на кончике но­жа) В качестве восстановителя может быть использован и другой реактив, например, капля миогосерпистого аммония. Препарат покрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом.

В препарате видны розово-красного цвета глыбки гемо- хромогена. Нужно выбрать одну нз них — более прозрач­ную, окрашенную в интенсивно розовый (но не красный) цвет и установить ее в центре поля зрения микроскопа; если эта глыбка очень мала, исследование производят с большим увеличением микроскопа.

Для наблюдения спектра гемохромогена окуляр микро­скопа заменяют спектральной насадкой АУ-16 (рис. 79).

Методика рабогы со спектральной насадкой следующая.

1. Нижнюю часть насадки надевают на тубус микро­скопа до упора так, чтобы барашек (/), закрепляющий на­садку на тубусе, находился елевой стороны от наблюдателя.

2. Верхнюю спектральную часть насадки (2) отводят в сторону. Выдвижением барашка (3) производят выключе-

Рис. 79 Спектральная насадка АУ-16. Пояснение о тексте.

ние имеющейся в окулярной части насадки щелевой диаф­рагмы из хода лучей и введение вместо нее круглой диафрагмы, заключенной в нижней окулярной часги на­садки (-/).

3. Производят фокусировку тубуса микроскопа и уста­новку в центре поля зрения розовой глыбкн, выбранной для исследования.

4. Выдвинув барашек (3), включают щелевую диафраг­му н вращением барашка устанавливают щель на наимень­ший размер. Величина щели может регулироваться в про­цессе исследования в зависимости от яркости источника света. При слишком широкой щели можно не обнаружить полос поглощения. Объект исследования должен занимать всю щель. Для этого щель можно укорачивать снизу штор-

ь ^й

кои, вращая барашек (5), а сверху — призмой, выключае­мой рукояткой.

5. После этого спектральную часть насадки возвращают на место и наблюдают спектр.

G. Для контроля полученного спектра поглощения его можно сравнить со спектром эталонного раствора гемохро­могена, помещенного в кювете в зажим (6)\ зеркало (7) слу­жит для подсвета эталонной кюветы. Для этой же цели можно использовать конт­рольную шкалу длин волн, находящуюся в дистальном конце отростка (8), вмонти­рованного с правой стороны корпуса спектральной части насадки. Шкала подсвечи­вается зеркалом (9).

Наблюдение спектра ге­мохромогена можно вести с помощью спектральной на­садки СПО-1, что осуществ­ляется в том же порядке, но с учетом небольших разли­чий, имеющихся в се устрой­стве (рис. 80). Окулярная часть (4) насадки СПО-1 не

имеет круглой диафрагмы н р»с. 80. Спектральная насадка поэтому выбор для исследо- СПО-1. Пояснения d тексте, вания глыбки и фокусиро­вание тубуса следует осуществлять при широко раскрытой щелевой диафрагме. Затем вращением аналогичного ба­рашка (3) щель устанавливают на наименьший размер и опускают спектральную часть насадки (2). Рукояткой (5) поднимают нижнюю шторку. Зажим (б) и зеркало (7) слу­жат для удерживания и подсвета контрольной кюветы.

В случае наличия гемохромогена, как и при исследова­нии растворов крови, видны две полосы поглощения н желто-зеленой части спектра между фраунгоферовыми линиями D и Е.

Если гемохромогеновая проба все же дает отрицатель­ный результат, то это может зависеть либо от отсутствия крови, либо от того, что кровь очень сильно изменилась,

разложилась и ие расФнорястся в едкой щелочи. Для про⁴ верки применяют гематопорфириновую пробу.

Получение спектра г е м а т о п о р ф н р и н а. ІІа предметное стекло помещают разволокнениые ниточки или измельченный соскоб из мест, подозрительных на кровь. Добавляют 1—2 капли концентрированной серной кислоты (11₂ЬО.;) п накрывают покровным стеклом. Под влиянием серной кислоты образуется кислый гематопорфнрнн. Под микроскопом при этом .видны участки фиолетово-красного цвета. Нужно выбрать участок, не обладающий большой плотностью, имеющий бледно-фнолетово-красный цвет, и установить его в центре поля зрения микроскопа.

Как и при получении спектра гемохромогена, с помощью спектральной насадки производят микроспектралыюе ис­следование выбранного участка. В случае обнаружения ге- матопорфирина можно наблюдать его спектр в виде двух полос: левая узкая, расположенная слева от линии D, и пра­вая в желто-зеленой части спектра между фрауигоферовы- ми линиями D и Е. Из-за значительно меньшей чувстви­тельности спектра гематопорфирина по сравнению со спек- тром гемохромогеиа при малом количестве крови гемато­порфир нн может быть не найден даже в следах, где был установлен гемохро.моген. Поэтому только при отрицатель­ных результатах обеих проб — на гемохромоген и иа гема- топорфирнн — можно сделать вывод, что крови на вещест­венных доказательствах не обнаружено.

Установление видовой принадлежности кровн в и я т н а х. Реакция преципитации Ч и с т о в и ч а — У л е и г у т а

Реакция преципитации Чистовича — Улснгута позволя­ет определить вид белка исследуемой крови.

Объекты исследования: вытяжка из пятен крови человека и животного (собаки), вытяжка из предмета носителя без пятен крови (контроль).

Приборы и пособия: пробирки с оттянутым нижним концом (на штативах), стерильные пастеровские пипетки, черная бумага или картон.

Реактивы: физиологический раствор, иреиипитирующие сыво­ротки на белок человека и собаки, растворы белка 1 : 1000 человека и собаки (антигены).

Для проведения этой реакции студенты пользуются вы­тяжками из пятен крови н предмета-носителя, подготовлен­ными заранее и проверенными иа содержание в них белка (прецинитнногена), видовую принадлежность которого требуется определить.

На штатив устанавливают три ряда небольших специ­альных пробирок с оттянутым нижним концом, по четыре в каждом ряду (рис. 81). В пробирки каждого ряда помеща­ются: вытяжка из исследуемого пятна крови (1-я пробир­ка), вытяжка из предмета-носителя без следов крови (2-я пробирка), физиологический раствор, которым произ­водилось экстрагирование (3-я пробирка), раствор 1 :1000 того вида белка, на который изготовлена сыворотка — анти-

Опрсдслсние вида краби Рсокиия преципитации Чистобича - Уленгута Постановко реакции

11

В пробирки первого ряда с помошыо Пастеровской пи - петли опускают прсии пи ти­рующую ct/воротку на бе­лел человека

В пробирки третьего ряди на белок свиньи

в пробирки второго ря- ва на белок лвшоди

второй ряд пробирок

Первый ряд пробирок

to

в пробирки т 1,5. В находится вытяжка из исследуемого пятна крови

В пробирках ?., б 10- бы тяжка из предмета-носителя

ш

в пробирках 3,7, И физиологи­ческий раствор, которым производилось зкетрагиро- бание белков крови из пя­тен

в остальных пробирках на­ходятся разведения антиге­нов 1 1000 В пробирке б-че­ловеческого, В в-лтиодиного и в 12-сВиного

Тритии ряд пробирок Рис 81. Схема постановки реакции преципитации.

ген (4-я пробирка). На каждой пробирке ряда делают над­писи (по одной букве) карандашом по стеклу: иа 1-й про­бирке— П (пятно), на 2-й пробирке — К (контроль), на

3- й пробирке — Ф (физиологический раствор), на 4-й про­бирке — А (антиген). Размещение в пробирки указанных вытяжек и растворов, а также последующее прибавление к ним иреципитирующнх сывороток производится пастеров­ской пипеткой (отдельной для каждой пробирки).

225

Вытяжки нз пятен и предмета-носителя, физиологиче­ский раствор и антиген целесообразно наливать до уровня перехода узкой части пробирки в широкую. Сыворотку следует добавлять в количестве, равном примерно */io на­литой вытяжки, что соответствует капиллярной части пи­петки. Наилучшим соотношением являются 0,9 мл вытяжки и 0,1 мл сыворотки.

15 Практик) и по судебной медицине

В первый ряд пробирок вносится преципитирующая сы­воротка на белок человека. Во второй ряд добавляется какая-либо другая преципитирующая сыворотка, например на белок собаки, в третий ряд — другого животного^[9].

Набрав сыворотку в капилляр, держат пипетку в гори­зонтальном положении правой рукой, плотно зажав указа­тельным пальцем ее верхний конец. Пробирку с вытяжкой держат в левой руке также горизонтально; двигая пробир­ку навстречу пипетке, приводят в соприкосновение конец пипетки со дном пробирки и переводят их в вертикальное юложенне. Затем ослабляют давление пальца на верхний конец пипетки: при этом сыворотка медленно опускается на дно пробирки и размещается под слоем вытяжки (остав­шуюся в капилляре сыворотку выдувать в пробирку не следует). Верхний конец пастеровской пипетки вновь плот­но зажимают пальцем и осторожно извлекают ее из про­бирки.

В рабочих тетрадях студенты фиксируют, в какой из про­бирок кал того ряда и через какой срок появился осадок (преципитат). Он лучше заметен на черном фоне, которыт может служить кусок черной бумаги, картона и т. д. Вы­падение колец осадка происходит в пределах от 1 до 10 ми­нут. За теми пробирками, где колеи осадка не отмечено, наблюдение ведется в течение часа (срок специфичности сыворотки).

Запись в тетради должна иметь примерно следующий вид:

В данном примере после прибавления сыворотки на бе­лок человека кольцо преципитации образовалось в 1-й

пробирке с вытяжкой из пятна и в 4-й, где содержится ан­тиген. Это позволяет считать, что в исследуемом пятне обнаружен белок человека. Специфичность полученного осадка подтверждается отрицательным результатом реак­ции с прецииитирующей сывороткой на белок собаки, до­бавление которой к новой порции вытяжки из того же пятна не повлекло за собой выпадение осадка в 1-й про­бирке. Эта же сыворотка в 4-й пробирке, где содержится раствор белка собаки (антиген), вызвала, как и следовало ожидать, образование кольца преципитации.

В случае образования осадка не только в вытяжке из пятна, но и в вытяжке из предмета-носителя высказаться о виде крови не представляется возможным, так как нель­зя установить, зависит ли положительный результат ре­акции от наличия белка в следах крови или от присутствия его на предмете-носителе.

Положительному исходу реакции препятствуют очень малое количество белка, значительная, не поддающаяся устранению мутность вытяжки из пятна крови и предмета- носителя, когда бывает трудно рассмотреть осадок, а так­же воздействия, ведущие к коагуляции и денатурации бел­ка (сильное нагревание при кипячении, глажении и т. д.), гниение, примеси ржавчины, солей и т. д. В таких случаях ставят реакцию связывания комплемента или реакцию ана­филаксии.

Определение групп системы MN (типов) в жидкой крови

Кроме групповых свойств системы АВО, в эритроцитах содержатся групповые агглютиногены М и N, называемые- еще типовыми. В зависимости от типовых свойств кровь всех люден разделяется на три типа: М, N и MN.

У людей с одинаковой групповой принадлежностью крови типовые свойства могут быть различными Это имеет большое практическое значение при решении вопросов об индивидуальной принадлежности крови и при исключении отцовства.

Объекты исследования: свежая жидкая кровь из трупов,, кровь, взятая из пальца у донора (студента).

Приборы, пособия, реактивы иглы для укола пальца^ сыворотки анти-М и аити-N, чашки Петри, предметные стекпа. стеклян­ные палочки с закругленными концами, карандаши по стеклу, секундо­мер, спирт, йод, вита.

Кровь из пальца донора берут путем укола иглой с со­блюдением мер асептики. Установление свойств М и N производится с помощью реакции агглютинации.

Для обнаружения агглютиногснов М и N чистую чашку Петри или предметное стекло делят вертикальной чертой на две половины карандашом и наносят обозначения: иа

Рис. 82. Размещение исследуе­мой кропи и сывороток при установлении типов жидкой крови.

одной стороне анти-М, па дру­гой—антн-N. На каждую по­ловину помещают по одной большой капле сыворотки и ря­дом с ними по капле исследуе­мой крови, по размерам при­близительно в 10 раз меньше, чем капля сыворотки. Сыво­ротку анти-М помещают иа ту половину, где имеется обозна­чение аити-М, сыворотку ан- ти-N — туда, где находится значок аити-N (рис. 82).

Заметив время по секундо­меру, производят одновремен­ное смешивание сывороток и крови стеклянными палочками, концы которых хорошо сглаже­ны. Наблюдают за появлением агглютинации, пользуясь сильным электрическим освещением. При отсутствии агглю­тинации наблюдение ведут в течение 5 минут (время специ­фичности сыворотки).

В раоочен тетради должны быть записаны результаты исследования и сделан вывод — какой тип крови установ­лен. Запись делается в виде таблицы по следующей схеме:

Примечай и е. Знаком + отмечается положительный результат, знаком — отсутствие агглютинации; цифры означают сроки появления агглютинации в секундах

Отрицательный результат реакции с обеими сыворотка­ми возможен вследствие разрушения агглютиногеиов М и

N под влиянием внешних воздействии, например гниения или непригодности примененных сывороток. Типовые свой­ства, хотя и обладают устойчивостью к нагреванию, высу­шиванию и т. д., все же разрушаются быстрее, чем свойст­ва А и В даже и жидкой крови.

Установление группы крови системы АВО и MNSs в пятнах (демонстрация)

Для установления групповой принадлежности высохшей крови, обнаруженной на вещественных доказательствах, не могут быть использованы методы, принятые в клиниче­ских лабораториях, в частности реакция агглютинации, так как при высыхании эритроциты сморщиваются и разру­шаются.

Агглютипогеиы системы АВО и MNSs в высохшей кро­си обнаруживаются методом абсорбции, основанным на способности агглютиногенов крови поглощать (абсорбиро­вать) одноименные агглютинины.

229

Обнаружение агглютиногенов АВО. Из пятна крови делают две одинаковые навески. Если залить каждую иммунными или гемагглютинирующимн (изосыво­ротками) а и р, то произойдет специфическое связывание того агглютинина, которому соответствует одноименный агглютпноген в пятне. Если такие находившиеся в сопри­косновении с пятном (абсорбированные) сыворотки под­вергнуть затем испытанию стандартными эритроцитами А и В (1% взвесь эритроцитов), то можно выявить проис­шедшие в сыворотках изменения. Так, если в пятне содер­жится агглютпноген В, то из прибавленных к пятну сыво­роток исчезнет агглютинин р н при последующем испытании абсорбированных сывороток эритроцитами В агглютина­ции не наступит. Сыворотка, содержащая агглютинин а. при этом останется без изменений и будет склеивать эрит­роциты группы А, так как ввиду отсутствия в пятне крови агглютиногена А содержащийся в сыворотке агглютинин а не будет абсорбирован. Если же в пятне содержится аг­глютпноген А и из сыворотки будет абсорбирован агглю­тинин а, то при испытании абсорбированных сывороток не будет агглютинации со стандартными эритроцитами А. с эритроцитами же В агглютинация будет иметь место. Если в крови агглютипогеиы А и В отсутствуют, то обе сыворот­ки ц и р останутся без изменений, что возможно в случае, когда кровь относится к группе 0(1).

16 Практикум по судебной медицине

Прямое выявление агглютиногена 0 производится тем же методом абсорбции с помощью иммунной сыворотки анти-0. Использовать изосыворотку для этой цели нельзя, так как агглютинин анти-0 в нормальной сыворотке челове­ка не содержится. При наличии в пятне крови одновремен­но агглютиногенов А и В (IV группа) свойства аир из обоих сывороток исчезнут (свяжутся с агглютиногена ми пятна) и агглютинации не будет со стандартными эритро­цитами обеих групп (А и В).

Обнаружение агглютининов в пятнах крови методом покровного стекла. Из ис­следуемого пятна крови вырезают три кусочка размером около 2X2 мм. Два из них помещают на противоположные концы предметного стекла, третий — на другое предметное стекло. К ним добавляют примерно 0,1% взвесь стандарт­ных эритроцитов: к одному — А, к другому — В, к треть­ему — 0. Препараты покрывают покровным стеклом и по­мещают во влажные камеры (во избежание подсыхания препарата и появления ложной агглютинации). При нали­чии в пятне крови того или иного агглютинина он благода­ря растворению крови вступает во взаимодействие с теми эритроцитами, которые содержат соответствующий ему агглютнноген, и вблизи кусочка происходит агглютинация.

Для дифференциальной диагностики с ложной агглю­тинацией имеют значение результаты исследования со стан­дартными эритроцитами группы 0 (третий кусочек). Аг­глютинация этих эритроцитов указывает на неспецифиче­ский результат реакции.

Занятие второе

Судебно-медицинское исследование спермы и волос

(проводится в учебной комнате)

План работы

1. Исследование спермы. Предварительное исследование в ультра­фиолетовых лучах н с помощью микрокристаллической реакции Фло­ранса.

2. Наблюдение люминесценции сперматозоидов в мнкропрепаратах с помощью люминесцентной насадки ОН-17 и люминесцентного микро­скопа.

3. Исследование волос. Просмотр коллекций препаратов: волокон растительных и искусственных, волос человека н животных, отпечатков кутикулы и поперечных срезов волос.

4. Решение учебной задачи по исследованию волос.

5. Изучение строения волос с помощью сравнительного микроскопа.

Пособия к занятию. Таблицы: 1. Кристаллы Флоранса. 2. Строение волос человека и животных. 3. Поперечные срезы волос. 4. Волосы обор­ванные, вырванные и выпавшие. 5. Волосы, подвергшиеся действию ту­пого орудия и высокой температуры. 6. Волосы при завивке «перма­нент». 7. Волосы с расщепленными, зашлифованными и обрезанными концами. 8. Негативные отпечатки кутикулы. 9. Волокна льна, шелка, хлопчатобумажные и др.

Приборы, реактивы и другие пособия перечислены по раз­делам.

Исследование спермы

При судебно-медицинском исследовании спермы уста­навливается: 1) имеется ли сперма на вещественных дока­зательствах (наличие спермы); 2) кому она принадлежит— человеку или животному (вид спермы); 3) какова группо­вая принадлежность спермы.

1. Предварительное исследование следов, подозритель­ных на сперму.

Объекты исследования: вещественные доказательства

(различные предметы) со следами спермы, пятна спермы на марле.

Приборы и пособия: аналитическая ртутно-кварцевая лам­па («Ультрасвет»), микроскоп, пастеровские пипетки, предметные и покровные стекла.

Реактивы: реактив Флоранса.

Исследование в ультрафиолетовых л у- ч а х. Для выявления следов спермы вещественные дока­зательства рассматриваются в лучах ртутно-кварцевой лампы («Ультрасвет»). При этом сперма, как и ряд других белковых веществ, дает беловато-голубоватую флюорес­ценцию (свечение). Исследование ведется в затемненном помещении. Пятна, дающие указанное свечение в ультра­фиолетовых лучах, обшивают ниткой для того, чтобы от­метить место их расположения. Эти участки как подозри­тельные на присутствие спермы подвергаются дальнейше­му исследованию.

Микрокристаллическая реакция Фло­ранса. Реактив Флоранса состоит из 1.65 части йодистого калия, 2,54 части кристаллического йода и 30 частей ди­стиллированной воды. Кусочки ткани из области пятна, подозрительного на сперму, или корочку (соскоб) помеща­ют на предметное стекло; разволокняют (измельчают) и добавляют 1—2 капли реактива Флоранса. Препарат на­крывают покровным стеклом. В присутствии спермы выпа­дают многочисленные кристаллы коричневого цвета в виде косых параллелограммов, иногда с раздвоенными концами (наподобие хвоста ласточки). Кристаллы лежат отдельно или складываются в кресты и образуют кучные скопления.

2. Доказательные методы обнаружения спермы. Дока­зательством присутствия спермы в пятнах является обнару­жение в них микроскопическим исследованием целых спер­матозоидов. Нахождение отдельных частей сперматозои­дов — головок или хвостиков — не позволяет утверждать наличия спермы, за исключением тех случаев, когда для окраски головок применены специальные методы. Напри­мер, окраска растворами двух ф.иоорохромов, при которой обнаруживается дифференцированная люминесценция ча­стей сперматозоидов.

Имеют значение только положительные результаты исследования. При азооспермии, некроспермии или разру­шении сперматозоидов под влиянием каких-либо внешних воздействий они не обнаруживаются, хотя пятно и проис­ходит от спермы.

М и к р о л ю м и н е с ц е II т н о е выявление сперматозоидов

Объекты исследования: пятна спермы на марле; готовые окрашенные флюорохромами препараты (мазки).

Приборы, пособия: биологический микроскоп с люминесцент­ным осветителем ОИ-17 (18).

При обработке препарата раствором флюорохромов (аурампн 00, акридиновый оранжевый и др.) наблюдается люминесценция (свечение) сперматозоидов и тем самым облегчается их выявление.

Для микролюминесцентиого выявления сперматозои­дов студенты получают готовые окрашенные препараты.

Наблюдение люминесценции сперматозоидов в микро­препаратах осуществляется с помощью люминесцентного микроскопа или биологического микроскопа с люминес­центным осветителем к микроскопу ОИ-17 (18). О порядке работы с люминесцентным осветителем и методике изго­товления препарата, скрашенного флюорохромами, см. главу 15

Исследование ведется в темной комнате. При этом в темном поле зрения видны светящиеся сперматозоиды: при окраске аурамином 00 наблюдается яркая темно-зеленая люминесценция всего сперматозоида. При окраске двумя флюорохромами — акридиновым оранжевым и аурами- ном 00 отмечается темно-розовое (оранжевое) свечение головки сперматозоида и зеленоватая или желто-зеленая люминесценция хвостика.

Исследование волос

При исследовании волос подлежат разрешению следу­ющие вопросы:

1. Являются ли присланные объекты действительно во­лосами (наличие волос).

2. Кому принадлежат волосы — человеку или животному, а если животному, то какому (вид волос).

3. Региональное происхождение волос (с какой части тела).

4. Вырваны волосы или выпали, не подвергались ли они внешним воздействиям: механическим, тс| мическим и пр. (повреждения волос), искусственной окраске, гниению, за­грязнению (изменения волос).

5. Возможность происхождения волос от определенно­го лица (сходство волос).

!. Просмотр коллекции препаратов: волокон раститель­ного и иного происхождения, волос человека и животных, отпечатков кутикулы и поперечных срезов. Исследуются с помощью микроскопа:

1. Волокна шелка, льна, пеньки, хлопчатоб\ мажной ткани (I—4).

2. Волосы человека — пушковые, волосы с головы; вырванные и выпавшие, подвергшиеся действию высокой температуры, завивке «перманент», тупого твердого пред­мета; волосы с обрезанными, оборванными, метлообразно расщепленными концами (5—13).

3. Волосы животных: кролика, собаки, козы (14—16).

4. Отпечатки кутикулы волос человека и животно­го (17) ^[10].

Пояснения к препаратам. 1. Волокна шелка — бес­цветные (или окрашенные) нити, чаще прямые, реже из­витые, с ровными контурами и одинаковой шириной по всей длине, бесструктурные, иногда имеют матовый блеск и преломляют свет (рис. 83, а).

2. Хлопчатобумажные волокна—плоские спи­ралеобразно изогнутые по длине волоконца с каналом (или без канала) посередине (рнс. 83, б).

3. Волокна льна — цилиндрические нити, имеющие характерные утолщения, следующие на небольшом рас­стоянии друг от друга (наподобие утолщений в трубке ка­мыша). По всей длине волокна в центре его тянется пре­рывающийся узкий канал. На местах утолщений можно наблюдать поперечную нсчерченность (рис. 83, в).

локиа льна (в).

4. Волокна пеньки отличаются от волокон льна отсутствием утолщений по длине, имеют более густую по­перечную и продольную нсчерченность, канал в центре не всегда различим.

5. Пушковые волосы — тонкие, бесцветные, обыч­но лишенные сердцевины, вследствие чего они могут быть ошибочно приняты за волокна растительного и другого происхождения. Пушковые волосы часто имеют игловидно истонченный конец (что не наблюдается у волокон). В от­личие от растительных волокон пушковые волосы никогда не бывают изогнуты по длине (рис. 84).

6. Волосы с головы человека— сердцевина ча­ще всего в виде узкого прерывистого тяжа, иногда в виде островков, нередко совсем отсутствует, бесструктурна, тол-

Рнс. 84. Пушковые волосы с игловидно заостренным концом.

щина ее равна */б—^lh толщины волоса. Корковое вещест­во составляет главную массу волоса, в нем, преимущест­венно в периферической части, располагается пигмент (от золотисто-желтого до коричневого или черного). В се­дых волосах пигмент отсутствует. Благодаря плотному прилеганию свободных краев клеток кутикулы зубчатость оптического края волоса слабо заметна.

7. Вырванный и ли в ы п а в ш и й волос — выр­ванный жизнеспособный волос имеет сочную, часто дефор­мированную луковицу, на корневой его части и шейке находятся остатки влагалищных оболочек. Выпавший (от­живший) волос имеет колбообразную ороговевшую луко­вицу без остатков влагалищных оболочек.

8. Волос, подвергшийся действию высо­кой температуры (обожженный), колбообразно вздут, в корковом и мозговом слоях большое количество полостей, заполненных воздухом. Окраска его рыжеватая нз-за изменения ороговевшего вещества волоса. Там, где произошло обугливание, волос черного цвета скручен.

9. Волос при завивке «перманент» — свобод­ные края клеток кутикулы значительно отогнуты, как бы отошли от коркового слоя, волос выглядит «мохнатым», рисунок кутикулы резко изменен в результате действия ще­лочных растворов и последующего нагревания.

10. В о л о с, поврежденный тупым орудием, имеет неравномерное веретенообразное расширение вследствие расплющивания волоса при ударах, имеется растрескивание вещества, образование пустот и щелей в стволе. Может иметь место полное размятие и разъедине­ние поврежденных частей волоса.

11. Оборванный волос — обычно характеризуется ступенеобразной формой па месте разрыва. При быстром сильном рывке концы могут быть и ровными.

12. Волос, обрезанный при свежей стрижке, имеет горизонтальный или косо расположенный срез со множест­вом мелких зазубрин. Между поверхностью среза волоса н его боковыми сторонами образуются четко заметные острые или тупые углы. В случаях давней стрижки зазубрины краев среза сглажены, а углы закруглены. Края волоса, обрезанного тупыми ножницами, могут быть размяты.

13. Волос с метлообразио расщепленным концом — свободные концы длинных волос (головы, бо­роды, усов), давно не стриженные и подвергающиеся внешним воздействиям (например, трению об одежду), расщепляются, образуя «метелочку».

14. Волос кролика — имеет очень широкую сердце- вину в виде непрерывного равномерного тяжа, составляю­щую ⁹/ю толщины волоса. Клетки сердцевины расположе­ны в несколько рядов (сердцевина содержит воздух н пото­му может представляться черной). Корковый слой узкий, в белых волосах без пигмента, а в пигментированных — с зернами пигмента вокруг сердцевины. Зубчатость кути­кулы выражена значительно резче, чем у волоса человека, так как края клеток кутикулы обычно сильно отстоят друг от друга.

15. Волос собаки — сердцевина непрерывная, состав­ляет ОКОЛО */з—V2 толщины волоса, состоит из клеток раз­личной величины и имеет вид зернистого столбика. Пигмент довольно равномерно располагается по корковому слою, но все же превалирует свойственное для животных цент-

________

ралыюе его расположение (вблизи сердцевины). В пре­паратах волос белой собаки пигмент отсутствует. Зубча­тость оптического края ку­тикулы выражена нерезко.

16. Волос козы—сер­дцевина очень широка, рав­номерна, имеет как бы сет­чатое строение. Пушковые волосы не имеют сердцеви­ны. Кутикулярные чешуйки широки, зубчатость конту­ров выражена ясно.

17. Отпечатки кути­кулы волос человека и ж и в о т п ы х — у челове­ка линии рисунка кутикулы волнисты, зазубрены, боль­шей частью сближены, на протяжении волоса слабо варьируют. Наиболее слож­ный рисунок наблюдается в волосах бровей, ресниц, лоб­ка; у овцы - линии рисунка кутикулы не волнисты или слабо волнисты (то же отме­чается в отношении зазуб­ренности), большей частью отдалены, располагаются па­раллельно друг другу, иа протяжении волоса варьиру­ют; иногда линии образуют фигуры в виде правильных многоугольников (рис. 85).

18. Поперечные сре­зы волос — волосы с голо вы имеют круглую овальную, реже почкообразную форму, волосы с бороды и усов — неправильно треугольную, четырехугольную, с лобка — почкообразную или удлинен­но овальную. На поперечных

кутикулы БО­

РИС. 85. Отпечатки лос

I — свиньи; 2, 3, 4 — овцы Гостевые и* пушковые); 5 — кутикула волоса чело­века при завивке «перманент»; €— кутикула волоса человека

237

срезах хорошо видны цвет и оттенок пигмента, его характер н расположение (ближе к периферии коркового слоя). Ку­тикула в виде бесцветного ободка или цветного при искус­ственной окраске.

2. Решение учебной задачи по исследованию волос.

Объекты исследования: пакеты со вложенными в них во­лосами человека, в том числе подвергавшимися различным внешним воздействиям, и волосами животных, а также объекты, напоминающие полосы (волокна хлопка, пеньки, льна и т д). Общее число волос и •волокон в каждой задаче не должно превышать 6—8.

Приборы и пособия: микроскоп, предметные и покровные •стекла, сантиметровая линейка.

Реактивы: ксилол.

Вначале все объекты, находящиеся в пакете, исследу­ются макроскопически, затем детально изучаются под ми­кроскопом. Задание имеет целью установить: 1) являются ли исследуемые объекты волосами или волокнами; 2) кому принадлежат волосы—человеку или животному; 3) име­ются ли повреждения и изменения волос.

Осмотр волос. При осмотре определяются форма (прямой, волнистый, дугообразный и т. п.), длина (в санти­метрах), цвет и особенности (изменения формы, загрязне­ния и пр.) каждого волоса. Цвет обозначается как желтый, ’коричневый, черный, белый и т. д. Длина измеряется ли­нейкой или сантиметровой лентой.

Микроскопическое исследование.

Волос (или волокно) помещают иа предметное стекло и покрывают покровным. Под покровное стекло для про­светления подводят ксилол, который должен равномерно заполнять пространство между стеклами и не содержать пузырьков воздуха. Длинные волосы покрываются сразу несколькими покровными стеклами. При рассмотрении пре­парата устанавливают, имеют ли исследуемые объекты строение, свойственное волосу, т. е. сердцевину, корковый •слой, кутикулу. Сердцевина при отсутствии в ней воздуха бывает слабо различима, .особенно в волосах человека. В этих случаях нужно поле зрения микроскопа несколько затемнить, тогда сердцевина становится более заметной. •Структуру сердцевины, наполненной воздухом, обычно не удается рассмотреть: она имеет вид черной прерывистой или сплошной полосы. Тогда иа предметном стекле нужно разрезать волос бритвой. Ксилол вытесняет воздух из моз­гового слоя и строение его становится различимым. Зубча­тость оптического края волоса лучше заметна при рассмот­рении под большим увеличением. Является ли ис­следуемый объект волосом, устанавливается на основании характерной для волоса структуры строения.

Определение видовой принадлежности волос основано на особенностях строения сердцевины, коркового слоя и кутикулы волос человека и животных.

Сердцевина волос человека узкая, прерывистая, неравномерная по толщине, бесструктурная, иногда отсут-

Рнс. 86. Сравнительный микроскоп МС-51.

1 — штатив; 2 — кронштейн с тубусом; 3 — предметные статики; 4 — осветители; 5 — барашек механизма грубой подачи; 6 — барашек ми­крометрической подачи.

ствует; в волосах животных она широкая, непрерывная и равномерная по толщине. Имеет определенную структуру, неодинаковую у различных животных. Корковый слой в волосах человека составляет главную массу волоса, со­держит пигмент, располагающийся преимущественно по периферии его; в волосах животных корковый слой узкий, расположение в нем пигмента центральное (вокруг сердце­вины). Кутикула волос человека состоит из мелких клеток, прочно прилегающих друг к другу, вследствие чего зубчатость оптического края волоса слабо выражена. В во­лосах животных свободные края клеток отдалены друг от друга. Зубцы кутикулы крупные, хорошо заметные. Вопрос о принадлежности волос человеку или животному решает- ся на основании суммы полученных данных и не всегда легко разрешим. В волосах различных животных строение сердцевины, ее ширина, распределение пигментных зерен, форма и расположение кутнкулярных клеток неодинаковы. Это дает возможность дифференцировать вид животных, которым принадлежат исследуемые волосы.

Для разрешения указанных выше вопросов, а также определения повреждений и изменений волос студенты могут использовать для сравнения ранее просмотренные препараты из коллекции и учебные таблицы.

3. Сравнительное исследование волос.

Объекты исследования: готовые препараты волос человека с места происшествия и с головы обвиняемого, негативные отпечатки кутикулы этих волос.

Приборы и пособия: а) сравнительный микроскоп А1С-51;

б) таблицы с изображением негативных отпечатков кутикулы волос человека.

Методика работы с микроскопом МС-51 (рис. 86). Производится настройка освещения левой и пра­вой частей микроскопа (раздельно) путем регулировки рукояткой реостата и трансформатора осветителя. На пред­метные столики (3) устанавливают исследуемые препара­ты, которые укрепляются с помощью клемм. Исследование начинают с объективами малых увеличений. Фокусировка осуществляется подъемом или опусканием столиков отно­сительно объективов с помощью механизма грубой (бара­шек 5) и микрометрической подачи (барашек 6). Затем пе­реходят к работе с объективами больших увеличений.

На предметные столики сравнительного микроскопа помещают исследуемые препараты (на одни столик — объ­екты с места происшествия, на другой — с головы обвиняе­мого), которые наблюдаются в одном поле зрения одновре­менно. Это дает возможность сравнить строение всех слоев волоса, особенно цвет и оттенок пигмента, характер опти­ческого края волоса, характер рисунка кутикулы. Сравни­тельному исследованию нужно подвергать участки волос, расположенные приблизительно на одинаковых уровнях (у корня, в середине длины волоса и у верхушки). После изучения препаратов студенты должны сделать вывод о сходстве или различии исследуемых волос.

Исследование можно вести с помощью сравнительного окуляра, два патрубка которого помещаются в тубусы двух одинаковых микроскопов, стоящих рядом. В этом случае также два препарата, находящихся на столиках микроскопов, попадают в одно поле зрения.