Методы получения чистых культур, основанные на механическом разобщении бактериальных клеток
Дробный посев на поверхность агаровой среды (метод Дригальского) Подходящую агаровую среду разливают в чашки Петри, подсушивают при комнатной температуре 12-24 часа. Дно чашки Петри делят на три-четыре сектора.
Петлей материал или культуру вносят в первый сектор и штрихами распределяют по его поверхности. Затем петлю стерилизуют в пламени горелки, остужают, этот процесс можно ускорить, касаясь петлей внутренней поверхности крышки чашки Петри. Стерильной петлей касаются поверхности агара в засеянном секторе и затем проводят штрихообразный посев по поверхности среды во втором секторе. Петлю вновь прожигают и, как описано выше, засевают третий и четвертый секторы. Чашки инкубируют в термостате дном вверх, иначе на внутренней поверхности крышки образуется конденсат, капли которого падают на поверхность среды и приводят к сливному росту бактерий. Аналогичным способом посев можно производить стеклянным шпателем, но в этом случае удобнее производить последовательный засев нескольких чашек Петри со средой без деления площади чашки на сектора.При работе с анаэробными бактериями используют свежие агаровые среды (не позднее 4 часов после автоклавирования), чтобы не произошло накопления кислорода в среде. Более эффективен метод посева анаэробов штрихом на предварительно восстановленную агаровую среду и вращают их, чтобы агар, застывая, покрыл тонким слоем поверхность пробирок.
Посевы на таких пробирках инкубируют в обычных условиях, поскольку в них содержится газ без кислорода и они плотно закрыты резиновыми пробками.
Выделение чистой культуры последовательным разведением материала в жидкой среде Метод применяют в том случае, если искомый микроорганизм не растет на плотной среде. Необходимым условием также является количественное преобладание искомой бактерии в смешанной популяции. Методика посева подробно изложена в разделе «Определение количества жизнеспособных бактерий» — НВЧ-метод.
После инкубации в последних пробирках с максимальными разведениями материала, где наблюдается рост, достаточно велика вероятность наличия чистой культуры в результате размножения единичной клетки.Получение изолированных колоний методом посева в плотную питательную среду (последовательные разведения материала в плотной среде) Метод используют для получения изолированных колоний факультативных, а также облигатных анаэробов. Среды для этой цели должны быть достаточно прозрачными.
В наиболее простом варианте в пробирку, содержащую 15-20 мл расплавленной подходящей агаровой среды с температурой 45-50° С, вносят исследуемый материал, перемешивают со средой, выливают в стерильную чашку Петри и после застывания инкубируют. Колонии бактерий формируются в толще среды и на ее поверхности. Обычно готовят десятикратные разведения материала в пробирках с расплавленной агаровой средой и содержимое пробирок выливают в отдельные чашки Петри. Колонии, выросшие в толще среды, извлекают стерильными пастеровскими пипетками, вырезают скальпелем.
При выделении культур аэрочувствительных анаэробов материал разводят (6-10 разведений) и инкубируют в пробирках, заполненных на 2/3-2/4 агаровой средой (метод Вейона). Рекомендуется среду быстро охладить и, во избежание контакта с кислородом воздуха, залить поверхность стерильной смесью парафина и вазелинового масла (3:1). Для извлечения образовавшихся колоний удаляют слой парафина с вазелиновым маслом (стерильно!), слегка нагревают стенки пробирки до появления тонкого слоя расплавленного агара, затем столбик среды вытряхивают в стерильную чашку Петри. Колонии извлекают из агара пастеровскими пипетками, стерильным скальпелем, бактериологической петлей и пересевают в подходящую жидкую питательную среду. Аналогичным образом культивирование можно проводить в капиллярных трубках. В этом случае поверхность трубки тщательно дезинфицируют, капилляр разламывают стерильным пинцетом, и участок с выбранной колонией засеивают в среду.
Еще по теме Методы получения чистых культур, основанные на механическом разобщении бактериальных клеток:
- Методические рекомендации по получению накопительных и чистых культур бактерий в ветеринарных диагностических лабораториях
- Получение эксплантационного материала в эксперименте на культуре клеток-предшественников стромальных фибробластов костного мозга.
- Выделение чистых культур
- Биологические методы получения накопительных культур
- Физические методы получения накопительных культур
- Химические методы получения накопительных культур
- Продукты технологии культур клеток и тканей животных и растений
- Культура клеток
- Основные типы культур клеток животных и растений
- 4.1. Общая характеристика феномена «спонтанной» малигнизации клеток в культуре
- 9.2. Получение компетентных клеток Escherichia coli.
- Технологическая схема производства продуктов на основе культур клеток животных и растений