1.З. Определение статуса метилирования CpG-островка З2 при раке шейки матки.

Анализ статуса метилирования CpG-островка 32 был проведен в 22 образцах опухолей шейки матки, 15 нормальных тканей шейки матки и 7

- 71 -

лейкоцитов периферической крови тех же пациентов, и в двух клеточных

линиях карцином шейки матки методом метил-чувствительной ПЦР.

Использовали два варианта анализа: одновременное расщепление четырех (1

сайт NarI и 3 сайта HpaII) или шести (3 сайт HpaII и 3 сайта HhaI) сайтов

узнавания метилчувствительных рестриктаз в участке CpG-островка,

который затем подвергался амплификации. В большинстве опухолей,

лейкоцитов и условно нормальных тканях и в двух клеточных линий после

обработки метилчувствительными рестриктазами присутствовал продукт

271Л 271О 275Л 275О HeLa SiHa R RNH R RNH R RNH R RNH R RHHh R RHHh M

451Н 451О 456Н 456О R RHHh R RHHh R RHHh R RHHh М _ _. ._ Щи ^m ^m m* -HULL

-300ul

Рисунок 12. Анализ статуса метилирования CpG динуклеотидов, входящих в состав сайтов рестрикции метилчувствительных ферментов NarI, HpaII и HhaI в пределах CpG островка 32 методом МЧ-ПЦР. Рестрикция образцов ДНК RsaI (R); RsaI/NarI/HpaII (RNH); RsaI/HpaII/HhaI (RHHh). Числами вверху указаны номера образцов, где Л - ДНК из лейкоцитов, Н - ДНК из нормального эпителия, О - ДНК из опухоли шейки матки; М -маркер 100 bp, числами справа указаны размеры маркерных фрагментов.

амплификации, что говорит о метилировании всех исследуемых сайтов (рис. 12, образцы 271, 451, 456, клетки HeLa и SiHa). В одном из 22 образцов продукт ПЦР отсутствовал (рис. 12, образец 275). Наличие метилированных аллелей исследуемого CpG-островка в большинстве лейкоцитов, опухолевых и нормальных тканях шейки матки дает основание предполагать, что CpG-островок 32 может быть расположен в подверженном импринтингу локусе хромосомы 13.

моноаллельной экспрессии гена. Недавно было обнаружено, что потеря импринтинга гена IGF-II наблюдается не только в опухолях кишечника, но и в нормальных тканях (лейкоцитах) этих же пациентов (Cui et al. 1998). Возможно, что отсутствие метилирования CpG-островка 32 у пациента 275 в опухолевой ткани и в лейкоцитах периферической крови связано с утратой импринтинга.

Таким образом, CpG-островок 32 действительно дифференциально метилирован в некоторых опухолевых и нормальных тканях. Предположение о том, что CpG-островок 32 локализован в подверженном импринтингу районе хромосомы 13, указывает на необходимость соответствующего детального исследования этого района в дальнейшем. К сожалению CpG-островок 32 пока не ассоциирован с каким-либо геном. В этом районе пока не обнаружено рамок считывания, подтвержденных наличием EST.