12. Обратная транскрипция.

Для обратной транскрипции использовали 1 мкг тотальной клеточной РНК. Реакцию проводили в конечном объеме 20 мкл в следующих условиях: 1 буфер для обратной транскрипции, 0.01 М дитиотрейтол, 0.5 мМ каждого из четырех дезоксинуклеотид-трифосфатов, 10 пмоль гексапраймера и 200 ед.

акт. обратной транскриптазы Superscript II RnaseH- ("GibcoBRL", США). Первоначально смесь РНК и гексапраймера в соответствующем объеме прогревали при 70оС в течение 10 мин. Затем охлаждали в ледяной бане и добавляли оставшиеся компоненты. Реакционную смесь выдерживали при 25оС в течение 10 мин для удлинения праймера и проводили основную реакцию обратной транскрипции при 42оС в течение 1 ч. Реакционную смесь прогревали при 70оС в течение 15 мин для инактивации фермента и разводили бидистилированной водой до конечного объема 100 мкл. Полученную кДНК в количествах подобранных экспериментальным путем использовали в полуколичественной ПЦР со специфическими праймерами. Условия проведения ПЦР описаны в п. 5.3.

<< | >>

↑

Источник: ПЕТРЕНКО АНАТОЛИЙ АНАТОЛЬЕВИЧ. Анализ метилирования ДНК при раке шейки матки. 2003

Еще по теме 12. Обратная транскрипция.:

- Детская онкология - Кардиоонкология - Лечение онкологических заболеваний - Онкогастроэнтерология - Онконефрология - Паллиативная медицина -

- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -