2.6 Исследования на анаэробы

2.6.1 50 г корма растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором и засевают в несколько пробирок со средой Китта-Тароцци, молоком и по две чашки со средами Вильсона-Блера и кровяным агаром по Цейслеру.

2.6.2 Результаты посевов регистрируют в первый же день. Почернение среды Вильсона-Блера в течение 1-3 часов после посева, свертывание молока с образованием ноздревато-губчатого сгустка и прозрачной сыворотки в течение 6 часов, а также быстрое начало роста на среде Китта-Тароцци (через 4-5 часов) при обильном газообразовании является характерным для клостридиум перфрингенс.

Рост клостридиум ботулинум, наблюдаемый обычно на 2-3-й день, характеризуется помутнением среды Китта-Тароцци, образованием осадка и запахом прогорклого масла.

При обнаружении роста на среде Китта - Тароцци производят микроскопическое исследование и выделение чистой культуры посевом на 2-3 чашки с кровяным агаром по Цейслеру, которые выдерживают в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 24-48 часов, после чего просматривают рост в чашках и отбирают культуры, которые классифицируют по морфологическим и биохимическим свойствам, согласно таблице 3.

Биологическую пробу проводят на морских свинках или белых мышах путем внутрибрюшинного заражения бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через 12-48 часов.

2.6.3 Для идентификации отдельных возбудителей или типов одного вида ставят опыт нейтрализации токсина специфической сывороткой. Для этого минимальную смертельную дозу культуры в смеси с 0,2-0,5 мл соответствующей типа специфической сыворотки выдерживают в термостате 45 минут и вводят мышам внутрибрюшинно.

2.6.4 При исследовании кормов на ботулизм (наличие токсинов) в качестве подопытных животных используют белых мышей. При этом могут быть применены два способа.

Таблица 3

Морфологические и культуральные свойства анаэробов

2.6.4.1 Нейтрализация токсина противоботулиновой сывороткой (антитоксином). Корм предварительно растирают в ступке со стерильным физиологическим раствором (1:4) и настаивают в течение 1-2 часов при комнатной температуре. Настой центрифугируют и фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

Аналогичное исследование может быть проведено с 6-7-суточной культурой, выращенной на печеночном бульоне. В этом случае пастеровской пипеткой с грушей отсасывают верхний слой культуры, который фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Далее поступают, как указано выше.

2.6.4.2 Разрушение токсина кипячением фильтрата. Фильтрат готовят, как указано в пп. 2.6.4.1 и 2.6.4. Одну половину фильтрата кипятят в течение 30 минут. Затем одному животному внутрибрюшинно вводят 0,5-1,0 мл некипяченого фильтрата, другому - в этой же дозе прокипяченного.

2.6.5 Положительным результатом биологической пробы по первому и второму способам считают гибель мышей, наступившую как от фильтрата, не обработанного противоботулиновой сывороткой, так и от фильтрата, не подвергнутого кипячению.