Микроскопическое исследование живых клеток бактерий
Препарат раздавленная капля. На чистое предметное стекло наносят 0,05-0,1 мл пробы (взвесь агаровой, бульонная культура) и накрывают покровным стеклом. Для предотвращения конвекционных токов, высыхания зазор между покровным и предметным стеклом заливают парафином.
Помимо формы и взаимного расположения клеток исследование такого препарата позволяет косвенно обнаружить наличие жгутиков. Изучение препарата проводят в обычном микроскопе с объективом х40 или х90 со слегка опущенным конденсором. Лучшие результаты достигаются при фазово-контрастной микроскопии. В этом случае слой жидкости должен быть максимально тонким, избыток влаги можно удалить при помощи фильтровальной бумаги. Облигатные анаэробы сохраняют подвижность только в центре препарата, но не по краям. Для активации подвижности облигатных аэробов в жидкость целесообразно ввести небольшие пузырьки воздуха. Перегревание за счет тепла от источника света может тормозить движение бактерий при длительном микроскпировании. В таких случаях целесообразно использовать тепловой фильтр.В обычном световом микроскопе клетки видны в виде светлых или серых «теней». При объективе х90 видны в основном бактерии неподвижные или двигающиеся в горизонтальной плоскости, перемещающиеся вертикально уходят из зоны фокусировки. Активное движение бактерий необходимо отличать от броуновского (колебательного) и движения всех клеток с током жидкости при наличии уклона. При работе с чистой культурой достаточно обнаружения одной-двух подвижных клеток для отнесения бактерий к подвижным. Монотрихи при движении по прямой линии переворачиваются на 180о и перемещаются в обратную сторону; лофотрихи двигаются вперед и назад без «кувырканий» и «поворотов»; перитрихи передвигаются беспорядочно, «кувыркаясь» по продольной оси.
Препарат висячая капля. Каплю пробы помещают в центр покровного стекла.
Используют специальное предметное стекло с «лункой». Края «лунки» смазывают вазелином, стекло переворачивают «лункой» вниз, прижимают к покровному стеклу с пробкой и резко переворачивают. Капля зависает под покровным стеклом в «лунке». Метод имеет недостатки – трудность фокусировки из-за вогнутости стекла, кривизна капли. Лучше всего фокусировка удается на краю капли.Метод висячего агарового слоя или микроколоний. Исследуемые бактерии выращивают на небольшом участке тонкого слоя питательного агара на предметном стекле. Для предотвращения высыхания стекло с агаром накрывают пластиной прозрачной пластмассы с отверстием для агарового участка, отверстие закрывают герметично покровным стеклом. По меря роста культуры препарат подвергают микроскопическому исследованию. При изучении таких препаратов возможно обнаружение поступательного движения некоторых бактерий на твердой поверхности среды, известное как «скольжение». Клетки, обладающие этим свойством, не имеют наружных жгутиков, движение медленное, параллельное продольной оси клетки. Наличие такой подвижности можно предположить, если при внимательном изучении краев колоний, обнаруживаются клетки на некотором расстоянии от колонии. По ходу движения клеток остаются волнообразные или спиралевидные рисунки.
Еще по теме Микроскопическое исследование живых клеток бактерий:
- Определение размеров клеток бактерий
- 1.2.2. Одним из наиболее очевидных и заметных изменений клеток при старении живых организмов
- Микроскопическое исследование на контаминацию грибами
- 3.4 Данные микроскопического, микологического и бактериологического исследований
- Результаты электронно-микроскопического исследования
- Микроскопический метод исследования
- Учет результатов микроскопического исследования при световой микроскопии
- Микроскопическое исследование
- Телемедицинские установки для микроскопических исследований ВВ DiViSy РМ2000
- Техника микроскопического исследования мазка
- Форма ответа ветеринарной лаборатории о результатах микроскопического, бактериологического, вирусологического, химико-токсикологического исследований
- Особенности пролиферации клеток из зон НПА и ВПА (исследование с помощью радиоавтографии)
- Исследование барабанной полости и клеток сосцевидного отростка
- Исследование токсичности и биосовместимости полимерных пористых матриксов при культивировании шванновских клеток
- Особенности пролиферации клеток из зон НПА и ВПА (исследование с помощью кривых роста)
- А. Окрашивание живых систем.
- Высокоточные методы измерения объема жидкости в живых организмах
- ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВКА ЖИВЫХ КЛЕЩЕЙ
- ДРУГИЕ ВИДЬі ЭКСПЕРТИЗЫ живых ЛИЦ (два занятия)