1.1. Анализ полиморфных вариантов і снов 1 фазы бнозрансформацин ксенобиотиков (CYPIAI, CYP2I)6, CYP2EE ЕРІ!XI)

Анализ полиморфизма гена CYPIAI

Нами было проведено изучение полиморфизма 7-ю ткзона ієна 014 At (lle-162 Val), приводящий к изменению каталитической акіивноези фермента (Havasbi et al .

Таблица 7

Анализ полиморфизма гена CYPIAI у рабочих

Примечание ыееь и далее

р-s..

\ оГп>ем выборки

Анализ распределения чаетоз аллелей и генотипов гена ('}'}'! А! не выявил тначимых различий между выборкой рабочих и кош рольной группой (табл 7). Уеіановлено, ч то чаеюта іеіерозигоіноіо і енотипа lie Val

составила 8,70% в производственной группе и 7,48% - в контроле. Данные показатели соответствуют частоте гетерозиготного генотипа в популяциях европеоидов, где на его долю приходится примерно 9,30% (Garte et al, 2001).

За последние годы появилось большое число работ, посвященных изучению полиморфизма гена CYPIAI в группах рабочих, подвергающихся промышленному воздействию комплексом углеводородов. Отмечается связь между мутантными аллелями гена CYP1A1 и повышением числа хромосомных аберраций, уровня АЛТ сыворотки крови, а также метаболитов токсичных веществ в крови и моче рабочих (Binkova et at, 1998; Brescia et al., 1999; Butkiewicz et al., 1999; Pan et al., 1998, Wu et al., 1999; Rojas et al., 2000; Zhang etal., 2001).

В литературных данных существуют указания на снижение частоты хромосомных повреждений в группах высокостажированных рабочих генетически устойчивых к влиянию неблагоприятных промышленных факторов, что объясняется естественным отбором индивидов и адаптацией организма к неблагоприятным условиям труда (Vodicka et al., 2001; 2002). Поскольку в нашу выборку вошли индивиды со стажем работы во вредных условиях труда от 10 лет и более существенных различий в распределении аллелей и генотипов гена CYPIAI между группами рабочих с учетом стажа работы обнаружено не было.

Для выявления маркерных аллельных состояний гена CYPIAI было проведено изучение полиморфных вариантов этого гена в зависимости от выраженности патологического состояния у работающих. Результаты исследования представлены в табл. 8; Анализ полиморфизма гена CYPIAI показал существенное повышение частоты гетерозиготного генотипа Ile/Val в группе рабочих с токсическим гепатитом. Так среди больных частота гетерозиготного генотипа составила 11,27%, что существенно выше встречаемости данного генотипа у здоровых рабочих (2,15%) (р=0,029).

Таблица S

Распределение і ено і инов и аллелей гена CYP1A1 у обследованных рабочих

Генотипы Аллели

Ile/Ile

ІІеЛаІ

Val Л al

lie

Val

«і

Группа профессиональных больных

X О

134

X

сравнению с 21,98% в группе здоровых рабочих. Показатель отношения шансов составил 2,42 (С!95% 1,151-5,133). В группе профессиональных больных существенно снижена частота нормального фенотипа эпоксидгидролазы по сравнению со здоровыми рабочими, OR составил 0,44 (С195% 0,222-0,882). Аналогичные распределение частот фенотипов микросомальной эпоксидгидролазы- было установлено среди, рабочих из «группы риска» (табл. 16). Показатель OR для медленного фенотипа в этом случае составил 2,03 (С195% 1,085-3,835). Существенных различий между изученными группами в характере распределения быстрого и очень медленного фенотипа эпоксидгидролазы обнаружено не было.

Полученные результаты, могут указывать на снижение детоксикационой способности клеток у индивидов гомозиготных носителей аллеля His. Возможно, что эпоксиды ароматических углеводородов, поступающих в организм рабочих или образующихся в процессе биотрансформации при наличии медленной формы эпоксидгидролазы, оказывают более выраженный токсический эффект, вызывающий повреждение клеток. Связь Т337С полиморфизма 3-го экзона гена ЕРНХ1 (аллель His) с риском развития хронических заболеваний печени (хронический, гепатит, гепатоцеллюлярной карциномой) была обнаружена в работах McGlynn К.

Таблица

Распределение фенотипов гена ЕРНХ1 у обследованных рабочих

Группа рабочих с соматическом патолої ней

Вместе с тем в работе Vodicka Р. с соавт. (2002) у рабочих производства стирола был обнаружен отбор рабочих с медленной формой микросомальной эпоксидгидролазы и аллелем His полиморфизма 4-го экзона гена ЕРНХ1 в пользу их большей устойчивости к вредным условиям труда. Возможно, что данное расхождение было получено в силу недостаточности

ь.

выборок обследованных рабочих и группы сравнения, которые включали 58 и 28 индивидов, соответственно (Vodicka et al., 2002). При изучении полиморфных вариантов гена ЕРНХ1 у рабочих, экспонированных стиролом, было показано, что в группе с высоким концентрациями токсичных веществ существенно увеличена частота HPRT мутаций при наличии алля His у обследованных (Hemminki, 1997). Следует отметить, что по результатам нашего исследования частота «медленного» аллеля (His) составляет у рабочих с токсическим гепатитом 25,34% и 26,38% в «группе риска», тогда как среди здоровых рабочих - 13,30%. Данная закономерность указывает на то, что присутствие аллеля His повышает риск развития токсического поражения печени у рабочих, подвергающихся воздействию гепатотропных веществ производств гептила и ЭБС. Наши результаты согласуются с работой Abdel-Rahman с соавт. (2003) по изучению полиморфных вариантов гена ЕРНХ1 у рабочих производства стирола (Юго-восточный Техас). В этой работе был продемонстрирован отбор рабочих имеющих нормальный генотип (определяющий нормальный.

При изучении полиморфизма гена ЕРНХ1 с учетом- активности ферментов печент и уровня билирубина выявлено, что генотипы Tyr/His и His/His гена ЕРНХ1 ассоциируется с увеличением уровня билирубина. Определено, что у рабочих с высокими показателями билирубина (более 20,5 мкмоль/л) генотип Tyr/His встречался с частотой 54,17% против 40,93% у рабочих с нормальным уровнем билирубина (8,5-20,5 мкмоль/л). Вариант His/His был обнаружен в 2,08% у рабочих с высоким уровнем билирубина, в 2,06% работающих с высоким АЛТ (более 33 ед/л), в 4,55% рабочих с высокими значениями ACT (более 32 ед/л), тогда как у рабочих с нормальным уровнем билирубина и нормальной активностью ACT (5-31 ед/л) данный генотип не встречался (%2=5,99, р=0,005; х2=4,79,. р=0,01; Х2=24,65, р-0,001, соответственно) (табл. 1 приложения).

Изучение A415G полиморфизма 4-го экзона нс выявило существенных различий в распределении генотипов гена ЕРНХ1 в зависимости от уровня АЛТ и билирубина. В тоже время было показано значительное повышение частоты гетерозигот и гомозигот ио мутации 4-го экзона гена ЕРНХ1 с увеличением активности ACT (более 32 ед/л) (табл. 1 приложения).

Подводя итог вышеописанному, следует отмстить, что частота аллелей и генотипов двух полиморфных локусов T337G и A415G гена ЕРНХ1 в группе рабочих не отличается от контрольной. Было установлено повышение частоты аллеля His в группе больных с токсическим гепатитом; в «группе риска» и среди рабочих с соматической патологией. Определено повышение частоты генотипа Arg/Arg в группе рабочих с соматической патологией по: сравнению со здоровыми. Выявлено увеличение частоты медленных и очень медленных метаболизаторов в-группах рабочих с токсическим гепатитом и: «группе риска». Установлена связь гетерозиготного генотипа (Tyr/His) и гомозиготного (His/His) по полиморфизму Т337С гена ЕРНХ1 с увеличением значений активности ферментов печени и билирубина.

4.2.