Приготовление посевного материала клеток

Посевной материал первичных клеток животных готовят по месту производства из тканей жи­вотных соответствующим образом. Иногда ткань не дезинтегрируют до клеток, а процесс получе­ния целевых продуктов (вирусов) проводят в механически измельченной до 1—2 мм переживающей ткани (например, эксплантатах куриных эмбрионов).

В зависимости от свойств культуры и отработанных условий хранения поддержание клеточных культур осуществляют различными способами. Клетки животных без существенной потери жизнеспособности почти неограниченно можно хранить в контейнерах с жидким азотом при тем­пературе, равной — 196°С. Клетки хранят в небольших пластиковых или стеклянных ампулах при концентрации приблизительно 10⁷ кл/мл в ростовой среде, дополненной 10% глицерином или ди- метилсульфоксидом, предохраняющих целостность клетки от разрушений при замораживании и оттаивании. Клетки для контроля их жизнеспособности периодически высевают на свежие пита­тельные среды.

Таким же способом хранят некоторые клетки растений в головных национальных банках кле­ток. Но он довольно сложен и не отработан еще для многих имеющихся клеток растений. Для них возможно лишь кратковременное хранение при температуре 4-6”С. Поэтому в рабочих банках кле­ток на производстве основным методом поддержания культур является их субкультивирование на агаризованных питательных средах.

Индекс роста, т.е.

Процесс выращивания инокулята или посевного материала в производственных условиях чаще всего осуществляют периодическим способом в его ступенчатом варианте. При этом на увеличение объема культуры от колб до производственного аппарата требуется много времени, исчисляемого от нескольких недель до нескольких месяцев. Для сокращения этого времени проводят полунеп­рерывное (отъемно-доливное) культивирование, при котором в качестве посевного материала для последующего цикла -культивирования в производственном аппарате используют определенную часть культуры из предыдущего цикла культивирования в этом же аппарате. Что касается возмож­ного непрерывного выращивания посевного материала в протоке, то по опыту классической биотехнологии такое выращивание может привести к ухудшению биосинтетических свойств ис­ходных штаммов. Кроме того, более сложна техника реализации процесса, особенно в обеспечении его асептичности.

2.3.