Приготовление и хранение посевного материала продуцентов тилозина

В литературе предложены различные среды для выращивания посевного материала продуцен­та тилозина. В основном они содержат такие компоненты как глюкоза, соевая мука, меласса, крах­мал, рыбная мука, кормовые дрожжи, кукурузный экстракт, соевое масло, NaCl, СаСО₃ .

Для приготовления посевного материала продуцентов тилозина используют косяки 1-й и 2-й ге­нерации, полученные после моноклонального рассева штаммов, лиофильно высушенные образцы культур, предварительно засеянные на косяки или вегетативную культуру, хранившуюся при тем­пературе + 5 °С.

Один из способов подготовки вегетативного посевного материала продуцента тилозина Str. fra- diae, полностью исключает стадию использования косяков.

Для продуцентов тилозина рекомендовано выращивать посевной материал при температуре 28 °С в течение 72 ч, при 29 °С в течение 48 ч и при 37 °С в течение 30 ч. Используемая доза посевно­го материала составляет, как правило, 5 % , в одной из работ предложено использовать дозу 25 % .

Имеется определенная связь между структурой колоний вегетативного посевного материала и продуктивностью штаммов. Так 3-суточный посевной материал высокоактивных штаммов харак­теризуется наличием многочисленных мелких однородных микроколоний, образующих СПЛ^_Ш_ ную сеть тонких гиф. Посевной материал менее активных штаммов представлен, как правило, бо микроколониями с редкой сетью гиф, либо отдельными группами плотных скоплений микрово- лоний. Эти морфологические характеристики сохраняются и в процессе ферментации и могут бх_1ть использованы как косвенный параметр для контроля за состоянием культуры (рис.

Характерной морфологической особенностью высокоактивных продуцентов тилозина, котор_ая может быть использована при осуществлении микроскопического контроля за качеством посеву, го материала и ходом процесса ферментации в период интенсивного синтеза антибиотика, явлц_ет_ СЯ наличие густой сети ТОНКИХ разветвленных гиф И отсутствие сплетенных сгустков MHKpOKOjjQ. ний с плотным центром и плохо развитыми короткими гифами.

Для продуцентов тилозина Str. fradiae 25А и Str. fradiae БС-1 показано, что возраст посевц_Ого материала не оказывает существенного влияния на антибиотическую активность культуры. Со_От. ветственно, если своевременно не приготовлен посевной материал или он низкого качества, а т^_к. же, если требуются его большие количества, для засева аппаратов может быть использована ку^_ь. туральная жидкость из ферментеров на различных сроках культивирования. Уменьшение дп^,

Рис. 3. Посевной материал штаммов Str. fradiae с различным уровнем антибиотической активности (3 сутки ), 25q а — Str. fradiae 25А; б — Str. fradiae 165; в — Str. fradiae 165 (неактивный вариант)

посевного материала сдвигает период интенсивного синтеза тилозина, но не сказывается на скорос­ти синтеза антибиотика и величине его концентрации в конце ферментации. Максимум накопле­ния биомассы в ферментации с дозой посевного материала 0,1 % достигается на 2,5 суток позже, чем с дозой 9 %, и на этот же срок сдвигается максимум накопления тилозина. Полученный ре­зультат был подтвержден при проведении ферментаций на аппаратах объемом 630 л и 63 м³.

В случае необходимости готовый посевной материал продуцентов тилозина можно сохранить в течение 1 месяца при температуре +5 °С в виде вегетативной культуры, выращенной на фермента­ционной среде (табл.

Для поддержания культуры в активном состоянии может быть использован рассев продуцента до отдельных колоний на агаризованных среде № 15 (с добавлением и без добавления тилозина), средах Гаузе-1 и Ваксмана с последующим отбором высокоактивных моноизолятов, которые в дальнейшем используются для приготовления посевного материала или закладываются на длительное хранение.

В качестве примера приведем опыт приготовления посевного материала для ферментеров объ­емом 630 л и 63 м³. Посевной материал (или инокулят) предварительно выращивали на качалке в течение 2—3 суток в колбах объемом 300 или 750 мл с 50 мл посевной среды — соевой или фермен­тационной с 1,5 % соевого масла. Доза засева составляла 2—4 % , температура культивирования - 28 ± 1 °С. При необходимости увеличения объема инокулята проводили засев продуцента дозой 2-4 % в колбы объемом Зле 500 мл среды. Для ферментеров объемом 630 л посевной материал го­товили как на качалке, так и в аппаратах без мешалок объемом 50 л с 30 л среды, которые засева­ли из колб дозой 3—4 %. Культуру выращивали в течение 1—2 суток при температуре 28 + 1 °С и рас­ходе воздуха 1,0 об./об. • мин. Для ферментеров объемом 63 м³ использовали, например, инокуля­торы и посевные аппараты объемом 2,5 м³. Объем среды в инокуляторах — 400 л, в посевных аппа­ратах — 800 л. Доза засева инокуляторов — 0,5 %, посевных аппаратов — 30-50 %, расход возду­ха в инокуляторах — 1,25 об./об. • мин, в посевных аппаратах — 0,7 об./об. • мин., время выра­щивания 24-36 и 10-16 часов, соответственно.

7.