Ферментативный гидролиз РНК

Альтернативой химическому гидролизу РНК является ферментативный гидролиз. Как пра­вило, его осуществляют с помощью технических комплексных ферментных препаратов микроб­ного происхождения, обладающими РНК-азной и фосфатазной активностью.

Все полученные до сих пор комплексные ферментные препараты, способные гидролизовать РНК до нуклеозидов, отличает не только ингибирование ферментов низкомолекулярными продуктами трансформации полирибонуклеотидов, но и самим субстратом, что позволяет гидролизовать РНК с начальными концентрациями не более 2 мае. % с пониженным выходом нуклеозидов (50-75 %).

Чтобы составить представление о процессе гидролиза, приведем два примера.

В Японии предложено использовать ферментативный препарат, выделенный экстракцией из клеток гриба Aspergilus огугае, который при температуре 45 °С за 20 ч гидролиза позволяет полу­чать нуклеозиды с выходом не более 64 % .

В России для тех же целей рекомендуется обрабатывать раствор РНК культуральной жид­костью после биосинтеза Str. coelicolor А-18 или А-165-25, содержащей внеклеточные экзонукле­азу и фосфатазу, при температуре 37-40 °С и pH среды 8,0-9,0 в течение 5-10 ч. Выход нуклеози­дов составляет 75 %.

Продолжительное время гидролиза создает риск развития в среде мезо- и термофильной мик-

рофлоры, что также отрицательно сказывается на выходе целевых продуктов.

Как вариант указанного выше способа можно рассматривать обработку субстрата предваритель­но осажденным в этаноле и высушенным ферментным препаратом, содержащим комплекс всех су­хих веществ культуральной жидкости стрептомицета в среде 15 % -ного этанола. При температуре 50 “С и показателе pH 5,2 за 10 ч гидролиза РНК на 90 % превращается в нуклеозиды. При этом раз­вития посторонней микрофлоры в среде не наблюдается. Такой способ становится конкурентоспо­собным альтернативному варианту химического гидролиза.

Независимо от способа гидролиза РНК растворы или суспензии, содержащие нуклеозиды, под­лежат последующей переработке.

3.4.