Гидролиз РНК химическими агентами

Существует много способов гидролиза РНК до нуклеозидов с применением различных химичес­ких агентов. Однако мы рассмотрим только те, которые могут иметь промышленное значение.

Изначально стремились использовать наиболее простые гидролизующие агенты.

В промышленности гидролиз РНК проводят при 120-140 °С, pH 4—6 в течение 5-20 ч в раство­ре, содержащем 8 М формиата или ацетата аммония (Япония). Лучше использовать последний, поскольку проще утилизировать стоки с колонн на последующей стадии ионообменного разделе­ния нуклеозидов.

Иной подход предусматривает применение для гидролиза гидроксидов кальция или свинца, эф­фективно превращающих полирибонуклеотиды в нуклеозиды при температуре 110-130 °С, моль­ном соотношении субстрат : гидроксид 1:1,7, pH 9,0 и времени гидролиза 3-5 ч.

Все технологии химического гидролиза РНК в нуклеозиды приводят к дезаминированию цити­дина на 50 % и более. Как исключение можно рассматривать гидроксид свинца. При оптимальных условиях проведения процесса цитидин превращается в уридин не более чем на 10 %. Однако ис­пользовать гидроксид свинца в технологии возможно только в малотоннажном производстве, пос­кольку свинец является сильно токсичным элементом, а образующиеся отходы в виде основных фосфатов свинца практически невозможно регенерировать или использовать в основном производ­стве. Однако получаемые при этом гидролизаты отличаются высоким качеством, не возникает проблемы очистки нуклеозидов от тяжелых металлов, и такое производство в виде биохимреакти- вов продолжительное время существовало в бывшем СССР.

Для крупнотоннажного производства более предпочтительно использовать гидроксид кальция. Образующийся при этом отход основного фосфата кальция не является токсичным и после предва­рительной подготовки может быть реализован как товарный продукт различного назначения. Од­нако следует иметь в виду, что выход цитидина при этом не превышает 30 %.

3.3.2.