Реактивы и оборудование:

набор для ПЦР Encyclo PCR kit; контрольная кДНК Clavularia;

ген-специфические праймеры для амплификации полной кодирующей последовательности гена флуоресцентного белка

Clavularia:

праймер 5'-direct (BamHI):

5'- TCACGGATCCAAGTGTAAATTTGTGTTCTGCCTGTC; праймер 3'-reverse (HindIII):

5'- TGTCAAGCTTAGGCCTGACTTGGCAGCAAAG; колонки для очистки ДНК;

вектор для клонирования (pQE-30);

T4 ДНК-лигаза с 10х буфером;

эндонуклеазы рестрикции BamHI и HindIII с буферным раствором (10X буфер W) и БСА;

Внимание! Эндонуклеазы рестрикции BamHI и HindIII проявляют близкую к 100% активность в буфере W (Сибэнзим): 10

мМ Трис-HCl, pH 8,5 при 25°C; 10 мМMgCl₂; 100 мМNaCl; 1 мМ

DTT).

эндонуклеаза рестрикции SmaI;

среда для культивирования бактерий LB, жидкая и агаризованная на чашках Петри; ампициллин (аптечный);

компетентные клетки E. coli для химической трансформации

Внимание! Компетентные клетки могут быть приготовлены согласно стандартным протоколам (например, [2, гл. 6,]);

реактивы и оборудование для гель-электрофореза;

минеральное масло для молекулярно-биологических работ или аптечное вазелиновое масло (если амплификатор не имеет нагревающейся крышки);

амплификатор; вортекс (опция); настольная центрифуга;

автоматические пипетки на 0,1-10, 10-20, 20-200 и 100­1000 мкл;

стерильные наконечники для пипеток; стерильные пробирки для ПЦР 0,5 мл;

холодильник (+14°С);

суховоздушный термостат;

оборудование для детекции флуоресценции;

водяной термостат (+42°С).

3.1.2.