Необходимые реактивы и оборудование:

набор для ПЦР Encyclo PCR kit

набор смесей адаптерных праймеров для RACE Mint RACE primer set (SK004)

50x Step-out mix 1 (праймер T7-M1 - 0.5 мкМ / праймер T7 - 5 мкМ):

T 7-М1: 5'-

GTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT

T 7:

5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC

50x Step-out mix 2 (праймер T7Na21 - 0.5 мкМ / праймер Na21 - 5 мкМ):

Na 21T7: 5'-

TGTAGCGTGAAGACGACAGAAGTAATACGACTCACTATAGGGC

Na 21: 5'-TGTAGCGTGAAGACGACAGAA

50x Step-out mix 3 (праймер Na21Na15 - 0.5 мкМ / праймер Na15 - 5 мкМ):

Na 15Na21: 5'-

AGCAGCGAACTCAGTACAACATGTAGCGTGAAGACGACAGAA

Na 15: 5'-AGCAGCGAACTCAGTACAACA

контрольная кДНК Clavularia;

ген-специфические праймеры для амплификации 3'- концевого фрагмента кДНК гена флуоресцентного белка из Clavularia (см.

dir1-NGH (10 мкМ): 5'-GAAGGAAATGTAAACGGGCA; dir2-NFP (10 мкМ): 5'-GTTTTGATGGGATGAACTTTCC; dir 3-WEP (10 мкМ): 5'- AAAACTTTGAAGTGGGAACC.

реактивы и оборудование для гель-электрофореза; минеральное масло для молекулярно-биологических работ или

аптечное вазелиновое масло (если амплификатор не имеет нагревающейся крышки);

амплификатор; вортекс (опция); настольная центрифуга;

автоматические пипетки на 0,1-10, 10-20, 20-200 и 100­1000 мкл;

стерильные наконечники для пипеток; стерильные пробирки для ПЦР 0,2 или 0,5 мл.

Рис. 3.3. Схема расположения праймеров для 3'-RACE гена флуоресцентного белка Clavularia

3.1.2.