Иммунологические методы

Исследование иммунного статуса в динамике заболевания проводилось в со­ответствии с общепринятыми рекомендациями. Учитывая циркадные суточные ритмы клеточных популяций, для оценки иммунного статуса использовали лишь результаты утренних исследований.

Фенотип лимфоцитов обследуемых лиц оценивался методом непрямої! флуо­ресценции с мышиными моноклональными антителами. На лимфоцитах определя­лось наличие молекул различных CD-рецепторов: CD3 (Т-лимфоциты), CD4 (Т- хелперы), CD8 (цитотоксические клетки / Г-супрессоры). Использовались монокло­нальные антитела, производимые ЗАО «Сорбент».

Концентрация сывороточных иммуноглобулинов А, М, G определялась мето­дом иммунопреципитации в агаровом геле.

Выявление ЦИК проводилось после инкубации с раствором ПЭГ-6000 с уче­том результатов на фотоэлсктроколо-риметре при длине волны 315 нм.

Для изучения структурно-метаболических параметров лимфоцитов их выде-

ляли из периферической крови обследованных лиц ио методике

A.Boyuin (1968). Выделение клеток производили из стабилизированной 2,7% рас­твором ЭДТА цельной венозной крови. После 3-кратного ее центрифугирования а течение 5-7 минут при 1000 об/мин полученную плазму, обогащенную лейкоцитами, наслаивали на раствор фнколл-верографииа (р=1,077 г/см³) и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 30 минут. Клетки, остающиеся на фиколл-всрографине. собирали при помощи пастеровской пинетки и ресусиендировали в забуференно.м физиологическом растворе NaCl (р№=7,4). Отмывка суспензии клеток производи­лась их центрифугированием при 1500 об/мин, 7 минут в забуференпом физиологи­ческом растворе. После этого сливали супернатант и клетки вновь ресуспендирова- ли в 1 мл физиологического раствора. Концентрацию полученной клеточной сус­пензии подсчитывали на счетчике «Picoscale PS-4».

Чистота взвеси выделенных лимфоцитов в мазках, окрашенных по Ро- мановскому-Гимза, составляла 95-96%.

2.5.