2.2.3 Иммунологические методы

Объектами для иммунологического исследования служили образцы крови, сыворотки и вагинальные смывы больных и женщин из контрольной группы.

Кровь и сыворотку использовали для оценки общей иммунореактивности следующими методами:

– иммуноцитохимический метод с использованием моноклональных анти- тел фирмы «DАКО» для иммунофенотипирование субпопуляций лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD20, CD25, CD16, соотношение CD4/CD8);

– спонтанный и активированный тест восстановления нитросинего тетразо- лия (НСТ-тест) для изучения функциональной активности нейтрофилов: опреде- ление фагоцитарного числа, коэффициента киллинга;

– метод радиальной диффузии по Манчини для определения уровня имму- ноглобулинов (Ig) класса G, А, М;

– иммуноферментный анализ с использованием коммерческих наборов

«Цитокин» для определения спонтанной и индуцированной фитогемагглютини- ном продукции ИФН-γ и индуцированной вирусом болезни Ньюкастла продукции ИФН-α в супернатантах цельной крови.

Для оценки местного иммунитета слизистой оболочки влагалища материа- лом для исследования был выбран вагинальный секрет – вагинальные смывы.

Вагинальные смывы (ВС) собирали после орошения влагалища 5 мл сте- рильного физиологического раствора. После центрифугирования лаважа при

1000 об/мин в течение 5 мин, отделяли надосадочную жидкость, образцы которой хранили до момента постановки при – 20С0. В собранных биосубстатах определя- ли уровни различных цитокинов методом твердофазного иммуноферментного анализа: α-ИФН и γ-ИФН, С5а, интерлейкины ИЛ-1β, ИЛ-4, ИЛ-8 и ИЛ-10 (ООО

«Цитокин», Россия), лейкоцитарной эластазы (ЛЭ), ТФР-β (Bender Med systems,

Австрия).