Методика выявления щелочной фосфатазы

Щелочная фосфатаза (ЩФ) или фосфогидролаза моноэфиров ортофос­форной кислоты локализуется в специфических, или вторичных гранулах нейтрофильных лейкоцитов. Отмечается повышение активности ЩФ в нейтрофилах при воспалении, облучении, интоксикации, острых повреждениях тканей, шоке.

Мазки крови фиксировали смесью формальде­гид-метанола в течение 30 с. (формальдегид – 10 мл, абсолютный метанол – 90 мл). Затем помещали на 20 мин. при комнатной температуре в инкубационную среду следующего состава: α-нафтил-фосфат натрия – 35 мг, прочный синий RR – 35 мг, трис-буфер, рН 9,6 (вместо пропандиолового буфера) – 35 мг. В 50 мл дистиллированной воды растворяли 2,42 г трис-буфера, добавляли 18,9 мл соляной кислоты, приливали дистиллированную воду до общего объема 100 мл. Докрашивали ядра 0,01% водным раствором азура II и микроскопировали (?90, ?10). Места локализации щелочной фосфатазы определялись в ви­де гранул коричневого цвета. Анализировали интенсивность окрашивания цитоплазмы 100 нейтрофилов, вычисляли средний цитохимический коэффициент (СЦК).

При проведении цитохимических исследований применялась оценка результатов по М.Г. Шубич, Б.С. Нагоеву (1980), основанная на выявлении специфической окраски различной степени интенсивности в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов.

Картина распределения и количества осадка позволила разделить клетки на четыре типа по степени активности фермента: «0» – отсутствие фермента, цитоплазма не окрашена; «1» – слабое диффузное окрашивание, единичные гранулы в цитоплазме; «2» – диффузная окраска с умеренным количеством гранул; «3» – сильно положительная реакция с многочисленными гранулами.

Для определения СЦК количественное выражение результатов проводилось путем подсчета 100 нейтрофилов с их дифференцировкой по описан­ному выше принципу. Число клеток с одинаковой активностью окраски ум­ножали на цифру, соответствующую данному типу степени активности фермента. Сумма этих произведений, деленная на 100, и представляет собой СЦК для одной клетки:

.