Методика выявления кислой фосфатазы

Кислая фосфатаза (КФ) или фосфогидролаза ортофосфорной кислоты постоянно локализуется в лизосомах или первичных, азурофильных гранулах нейтрофилов. Активность этого гидролитического фермента во многом оп­ределяет их функциональную способность.

Мазки крови фиксировали при 40С в холодном 10% формалине на 960 спирте в течение 30 с. Переносили мазки на 2 ч. при 370С в инкубационную среду следующего состава: раствор «А»: нафтол-фосфат или (AS-BI) – 20 мг диметилформамид – 0,5 мл, холодный 0,1 н. рас­твор уксуснокислого натрия (1,36 г уксуснокислого натрия растворяли в 100 мл дистиллированной воды) – 40 мл; раствор «Б»: 2% фуксин для фуксинсернистой кислоты на 1 н. HCI (4,04 мл концентрированной соляной кислоты доводили дистиллированной водой до 50 мл) – 8 капель, 4% раствор азотистокислого натрия – 8 капель. Рабочий раствор: раствор «А» сливали с раствором «Б», перемешивали, отфильтровывали, устанавли­вали рН 5,2-5,4 (если pH больше 5,4, то подкисляли 1 н. соляной кислотой) и докрашивали ядра 2% раствором метилового зеленого.

В местах локализации кислой фосфатазы отмечалось окра­шивание в коричневый цвет. Анализировали интенсивность окрашивания цитоплазмы 100 нейтрофилов, вычисляли средний цитохимический коэффициент (СЦК).