Гистологическое исследование

Кусочки для гистологической обработки вырезали так, чтобы в микроскопическом срезе сохранялись топографические соотношения, характерные для исследуемого материала. Блоки для проводки вырезали после фиксации.

Биоптат кожи помещали в емкость с фиксатором, объем фиксирующей жидкости превышал в 10–20 раз объем фиксируемого объекта. Если объект был разрезан на фрагменты толщиной более 5–6 мм, его оставляли в фиксаторе на 2–3 часа для уплотнения, после чего ткань рассекали на пластины толщиной 2–3 мм и помещали в свежий раствор фиксатора. Общее время фиксации при комнатной температуре (около 20°С) составляло от 18 до 24 часов. В повседневной работе в качестве фиксирующей жидкости использовали 10% раствор формалина или цинк-формалин, который обеспечивает сохранение антигенных детерминант для проведения иммуногистохимических исследований.

Обезвоживание и пропитывание парафином биоптатов кожи проводили вручную по восходящим спиртам (70%, 80%, 90% и 100%) в аппарате гистологической проводки тканей «Leica Peloris» («Leica Microsystems», Германия), заливали в парафин.

Срезы приготовляли толщиной 3–4 мкм. Использовался микротом ротационный Accu-Cut®SRM™200. С каждого парафинового блока делали 3–4 препарата для гистологических окрасок, на каждом препарате размещали 1–2 среза. Одну часть препаратов окрашивали гематоксилином-эозином, с другой частью материала проводили иммуногистохимическое исследование.

Препараты, окрашенные гематоксилином-эозином, подвергались микроскопическому исследованию. Использовался световой микроскоп «Olympus BX-51» (Япония), оборудованный цифровой камерой «Olympus XС-10» и программным обеспечением «Cell А» (Рисунок 2.5). Исследование эпидермиса и

дермы проводилось на увеличении ?100, ?200 и ?400. В гистологических препаратах определяли патоморфологические изменения в эпидермисе и дерме.

Рисунок 2.5 – Оборудование, используемое для приготовления и исследования гистологического препарата