Дизайн эксперимента и методы исследования

Экспериментальная работа по созданию модели кариеса дентина выполнена на 28 крысах линии Wistar массой 200-220 г. и 3-х беспородных собаках массой 15,0 кг, 10,0 кг и 12,0 кг. Экспериментальная модель формировалась с учетом литературных данных в собственной модификации (Гиззатуллина Л.

Все животные содержались в стандартных условиях вивария на полноценном рационе и были одного возраста. Все вмешательства на крысах проводились под хлороформным наркозом, на собаках под наркозом с использованием препаратов «Золетил» 0,5 мл и «Ксила» 1 мл, с соблюдением правил асептики и антисептики.

Предварительно, опытным путем было определено время действия и доза хлороформного наркоза для крыс. Наркотический сон крыс, продолжительностью 5 минут, достигался путем использования 8 капель хлороформа на животное массой 200-210 грамм. Затем животное размещали на фиксирующем устройстве с зажимами для конечностей.

Собакам проводилась премедикация 0,7 мл р-ра кардиамина и 1 мл димедрола. Для наркоза внутримышечно вводили 0,5 мл «Золетил» и 1 мл «Ксила», при этом достигался наркотический сон на 30-60 минут. Для выведения из наркоза собакам вводили 5 мл пирацетама. Крысы пробуждались естественным путем.

За этот временной промежуток у крыс препарировали первые моляры верхней челюсти в пределах околопульпарного дентина по II классу согласно классификации Black (1889), у собак препарировали по 4 премоляра на верхней челюсти и 4 премоляра на нижней челюсти в пределах околопульпарного дентина по I классу согласно классификации Black.

Экспериментальные животные подразделялись по группам на контрольную и опытную. В опытной группе животные подразделялись по срокам и количеству забора исследуемого материала (Таблица 2.1, 2.2).

Таблица 2.1 - Распределение экспериментальных крыс по срокам и кол-ву зубов

Таблица 2.2 - Распределение по количеству зубов и препаратов у собак

Зубы животных (крыс и собак) подразделялись на две группы; I группа (контроль) - проводился обычный метод лечения (препарирование полости, внесение адгезива OptiBond (Kerr), наложение пломбы Point 4 (Kerr). В первой группе проведено лечение 8-ми зубов у крыс и 4-х у собак.

Для морфологического исследования использовались твердые ткани зубов. Исследование проведено на уровне световой микроскопии (ZEIZZ AXIO Imager A2c) с использованием цифровой камеры AXIO Cam ER c 5s. Заданные условия эксперимента (микроскопирование) поддерживались автоматически программой Axio Vision 4.8.2 (Carl Zeizz Micro Imaging Gmbh, Германия). Ткани экстрагированных зубов фиксировались в растворе 10% нейтрального формалина. Декальцинацию проводили препаратом «Биодек» (BioVitrum). Обезвоживали в спиртах и заливали в парафинцеллоидиновую смесь. Готовили срезы толщиной 5­6 мкм и окрашивали их по Ван Гизон, гематоксилином и эозином. Иммуноцитохимическое исследование проведено иммунопероксидазным методом с использованием моноклональных антител производства фирм NOVOCASTRA, DAKO и Lab Vision к маркеру эндотелия сосудов, антигену CD31 (позволяет визуализировать сосуды в тканях). С целью визуализации результата реакции связывания антигена с антителом использовали систему детекции «UltraVision LP Value HRP Polymer» (козьи антитела к кролику и мыши), Lab Vision США.

Mорфометрическое исследование выполняли на препаратах с использованием программы Axio Vision и стандартной сетки Г.Г. Автандилова (1990), а также винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15хУ4,2.

В связи с высокой скоростью репаративных свойств твердых тканей зубов крыс, забор материала для морфологического исследования проводился в контрольные сроки на 4-е сутки после вмешательства. Так же проводился забор интактных зубов для контроля. У собак забор материала проводился в

контрольные сроки на 10-е сутки, для контроля проводился забор интактных зубов. Экстракция зубов проводилась у крыс после усыпления парами хлороформа. Собакам вводили внутримышечно 3 мл раствора «Аделин», после чего производили экстракцию зубов.

Для статистической обработки полученных данных была использована коммерческая программа Staistica 12. Оценивали параметрический t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони.

2.2