МЕТОДЫ ОЦЕНКИ ФАГОЦИТАРНОЙ РЕАКЦИИ ЛЕЙКОЦИТОВ

Оценивали фагоцитарную реакцию по состоянию нейтрофильных гранулоцитов (НГ). Тестирование-функций НГ проводили по следующим параметрам:

- количеству лейкоцитов в периферической крови;

- абсолютному и относительному числу циркулирующих НГ в периферической крови;

- состоянию рецеп торного аппарата по экспрессии Е-рецепторов НГ к эритроцитам барана в тесте Е-розеткообразования (Е-РОН);

- поглотительной способности в отношении частиц латекса;

- состоянию цитотоксической кислородзависимой системы по показателям спонтанного NBT-теста (тест с нитросиним тетразолием):

среднему цитохимическому коэффициенту (СЦК/NBT).

Содержание лейкоцитов и лейкограмму определяли общепринятым

методом с использование’ клавишного механического счётчика лейкоцитарной формулы крови СЛ 1 (ЗАО «ЛОиП», С.-Петербург, 1999). Общее число лейкоцитов определяли меланжсрным способом с последующим подсчётом клеток в камере Горяева. Для исследования лейкоцитарной формулы применяли способ окраски мазков периферической крови краской Романовского-Гимза. Высчитывали относительное и абсолютное количество Нг.

Состояние рецепторного аппарата НГ и их адгезивную способность оценивали по экспрессии нейтрофилами Е-рецепторов к эритроцитам барана в тесте Е-розегкообразования. При этом определяли количество Е- розеткообразующих нейтрофилов из 100 подсчитанных (Е РОИ). Поглотительную способность ИГ оценивали по относительному и абсолютному количеству активно фагоцитирующих клеток - активности фагоцитоза (АФ), т.е. способности нейтрофилов поглощать инертные частицы • меламиноформальдегидного латекса размером 1,5-2 мкм. Фагоцитом считали нейтрофил, поглотивший одну и более частиц латекса. Подсчитывали количество фагоцитов на 100 нейтрофилов и определяли активность фагоцитоза в %. Цитотоксическую кислородзависимую активность нейтрофилов определяли по образованию ими супероксидного

9

радикала, который выявляли в тесте восстановления нитросинего тетразолия (NBT) — в спонтанном NBT - тесте (Park, модификация Шубич, 1981). Тест основан на способности практически бесцветного индикатора NBT поглощаться и восстанавливаться до нерастворимого тёмно-синего днформазаиа в цитоплазме под действием продуцируемых фагоцитами активных форм кислорода (АФК), который легко идентифицировать в нейтрофилах визуально. При этом интенсивность окраски пропорциональна количеству образовавшегося Индикатора, отражающего клеточную активность. Определяли и средний цитохимический коэффициент (СЦК/NBT).

Определяли интеїральньїй показатель - индекс нагрузки (ИН), свидетельствующий о напряженности иммунной системы. Это соотношение показателей активности лимфоцитов и нейтрофилов в тестах Е- розеткообразования. Его вычисляли по формуле: ИН-Е-РОЛ/Е-РОН.

2.5.2