Иммуноферментная диагностика респираторно-синцитиальной вирусной инфекции

Определение специфических анти-РСВ IgM, IgG проводили методом ИФА с помощью набора RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS ELISA IgG/IgM (G/M 1006, VIRCELL MICROBIOLOGISTS, Испания). По данной методике специфические антитела, присутствующие в исследуемой сыворотке, связываются с инактивированными антигенами РСВ (штамм Long ATCC VR-26), адсорбированными на поверхности 96-луночного полистиролового микропланшета (VIRCELL RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS) в течение 45 минут в инкубаторе при температуре 37 ± 1 °С.

иммуноглобулины удаляются путем пятикратной промывки фосфатным буфером, содержащим Tween®-20 и Proclin. При повторной инкубации в течение 30 минут при температуре 37 ± 1 °С со специальным раствором конъюгата антител к IgG и/или IgM человека с пероксидазой в окрашенном в красный цвет буфере, содержащем Proclin, происходит реакция, в которой меченные ферментом антитела, связываются с уже образовавшимися на предыдущем этапе комплексами антиген-антитело. После инкубации опять следует пятикратная промывка и добавление в каждую лунку раствора субстрата тетраметилбензидина. Планшет инкубируется при комнатной температуре 20 минут. В результате произошедшей реакции, связавшийся фермент реагирует с субстратом, и образуется растворимый продукт голубого цвета. После добавления стоп-раствора (раствор серной кислоты) окраска меняется на желтую. Затем в

течение часа после остановки реакции считается оптическая плотность (ОП) с помощью спектрофотометра SUNRISE (Tecan, Switzerland) при двух длинах волн - 450/620 нм. Результаты оцениваются с помощью Индекса Антител (ИА), который вычисляется по формуле: (ОП образца/среднее значение ОП сыворотки для конторля Cut off) * 10. При значении ИА 11 - положительным. При получении сомнительного результата образцы тестировались повторно и/или производили взятие нового образца в динамике. Иммуноферментный анализ проводили в отделе вирусологии и молекулярно-биологических методов исследования ФГБУ НИИДИ ФМБА России (руководитель отдела - д.б.н. Мурина Е.А.).

2.5