Иммуноцитохимическая диагностика респираторно-синцитиальной вирусной инфекции
Выявление экспрессии антигенов РСВ осуществлялось иммуноцитохимическим методом в предварительно фиксированных 70 % этанолом цитологических препаратах, приготовленных из клеточного материала, полученного со слизистой оболочки ротоглотки и лейкоцитарной взвеси периферической крови.
Цитологические препараты со слизистой оболочки ротоглотки получали путем нанесения на предметное стекло мазков-соскобов. Для получения цитологических препаратов из лейкоцитарной взвеси, предварительно выполнялось ее выделение из периферической крови путем лизирования эритроцитов и центрифугирования. Иммуноцитохимические исследования выполнялись с использованием моноклональных мышиных антител (anti-RS-virus, Vector Lab, США в разведении 1/200) и полимерной иммуногистохимической системы LabVision Quanto (Thermo, США) в соответствии с рекомендациями производителей реагентов. В качестве оптически плотной метки, визуализирующей продукт реакции ангиген-антитело в клеточном материале, использовался диаминобензидин. Иммуноцитохимическая реакция осуществлялась в автоматическом аппарате для иммуногистохимических ииммуноцитохимических исследований Autostainer A360 (Thermo, США). После проведения ИЦХ реакции иммуноцитохимические препараты докрашивали гематоксилином и заключали под покровные стекла. Клетки, экспрессирующие антигены РСВ, имели отчетливое цитоплазматическое коричневое окрашивание, тогда как остальные (негативные) эпителиальные клетки окрашивались гематоксилином. Изучение иммуноцитохимических препаратов, а также качественный учет результатов иммуноцитохимического исследования проводились с использованием светооптического микроскопа Zeiss AxioScope A1 (Carl Zeiss, Германия).
Результаты оценивали по размерам, интенсивности окраски, локализации, количеству гранул в одной клетке, числу лимфоцитов, содержащих антиген и присутствии перинуклеарной экспрессии в агломератах лимфоцитов. В каждом мазке просматривали 100 и более клеток в одном поле зрения. При нахождении более 5 % лимфоцитов, содержащих антиген, результат считали положительным.
Эти исследования помогали нам выявлять вирусную активность с помощью качественно-полуколичественной оценки уровня экспрессии антигенов РСВ в лимфоцитах периферической крови и эпителии ротоглотки [30]. Исследование проводили в лаборатории патоморфологии ФГБУ НИИДИ ФМБА России (и.о. руководителя к.м.н. Карев В.Е.).
2.6