ЧАСТОТА И ХАРАКТЕР ИЗМЕНЧИВОСТИ ВИБРИОНОВ ЭЛЬ-ТОР, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ОБЪЕКТОВ

В период VII пандемии холеры вибрионы Эль-Тор, выде­ленные в СССР, часто по одному или нескольким признакам отличались от существующей в настоящее время таксономи­ческой характеристики.

Изменчивость основных дифференциально-диагностических признаков у вибрионов Эль-Тор, выделенных от людей (1885 штаммов), составила около 30%, а у выделенных из объектов окружающей среды в 1971—1981 гг. (5397 штаммов) — 44,4% и в 1982—1991 гг.—74,9% [Мединский Г.М. и др., 1982; Кюре- гян А.А. и др., 1991]. При этом следует отметить, что у многих штаммов вибриона Эль-Тор обнаруживали не один, а не­сколько признаков изменчивости.

Морфологические изменения колоний обнаружены у виб­рионов Эль-Тор, выделенных из различных источников. По данным Г.М. Мединского, М.И. Наркевича, Ю.М. Ломова и

Вирулентность гемолизположительных штаммов вибриона Эль-Тор, выделенных от людей в 1990—1991 гг.

Примечание.

соавт. (1991), атипичные формы колоний выявлены у вибри­онов Эль-Тор, выделенных из объектов окружающей среды в период вспышек холеры и при их отсутствии из различных источников с частотой от 1,2 до 11,3%. Следует отметить, что атипичные колонии вибрионов Эль-Тор соответствовали ти­пам колоний, освещенным ранее в классических трудах по холере.

У вибрионов Эль-Тор, выделенных в СССР в последнюю пандемию, обнаружены случаи пигментообразования. С.М.Му­хамедов, М.И.Инжеватова, В.А.Иванов и соавт. (1970) сооб­щили, что выделенные ими на территории Узбекской CCP от озерных лягушек 8 штаммов холерных вибрионов в R-форме при старении приобретали коричневую окраску. И.Л.Марти- невский, В.А.Малыгин и Ю.В.Канатов (1973) выделили из испражнений человека штамм вибриона Эль-Тор, который уже через 18—24 ч после посева на агар образовывал корич­невый пигмент. К 48 ч колонии теряли прозрачность и смор­щивались. По основным свойствам штамм был типичен, ге- молитичен, слабо лизировался классическим диагностическим холерным фагом. Г.В. Гальцева, А.Е. Либинзон, Р.М. Саямов и соавт. (1979) наблюдали образование коричневого пигмента у различных штаммов холерных вибрионов 01 и не 01 группы.

А.Г. Стогова, Д.М. Шек, Н.К. Куница (1979) сообщили о выделении из объектов окружающей среды 2 штаммов вибри­она Эль-Тор со значительно измененной морфологией кле­ток — в виде удлиненных палочек и нитевидных образований.

В табл. 63 суммированы материалы по частоте изменчивости основных свойств холерных вибрионов. У вибрионов Эль-Тор,

Частота изменчивости признаков, используемых при идентификации,

^,Во всех случаях имеется в виду снижение агглютинабельности до ¾ титра

выделенных от больных и вибриононосителей в 70-е годы, чаще всего наблюдалось снижение агглютинабельности холер­ными диагностическими сыворотками — О, Инаба и Огава; агглютинировавшиеся RO-сывороткой в 3 раза чаще выделя­лись от вибриононосителей, чем от больных холерой.

У вибрионов Эль-Тор, выделенных из объектов окружаю­щей среды, изменчивость носила несколько иной характер. Так, изменение агглютинабельности холерными диагности­ческими сыворотками наблюдалось реже, чем у вибрионов, выделенных от людей.

В 1971 — 1981 гг. из окружающей среды редко выделяли вибрионы Эль-Тор, агглютинирующиеся RO-сывороткой, а в 1982—1991 гг. процент таких культур повысился.

Реже, чем от людей, из окружающей среды выделяли виб­рионы Эль-Тор, чувствительные к полимиксину и не агглю-

у вибрионов Эль-Тор, выделенных из различных источников

сыворотки и ниже.

тонирующие куриные эритроциты. В то же время вибрионы Эль-Тор, выделенные из объектов окружающей среды, значи­тельно чаще были устойчивы к диагностическому фагу Эль- Тор, чем выделенные от людей. В 1971—1981 гг. устойчивые к этому фагу культуры из окружающей среды составляли 10,3— 12,5%, а в 1982—1991 гг.—в среднем уже 54,7%.

В табл. 64 представлена частота изменчивости вибрионов Эль-Тор, выделенных из окружающей среды, по годам (1982— 1991). Процент атипичных штаммов колебался от 59,3 до 85,1, в основном же составлял 72,9~78,1. В первые 4 года почти не встречались RO-варианты. Однако в последующие 6 лет такие культуры составляли от 2,7 до 10,5%.

Частота изменчивости свойств у вибрионов Эль-Тор серо- вара Огава в эти же годы превышала частоту изменчивости у вибрионов серовара Инаба (табл. 65). Наибольшая разница имела место в 1983 г. (14,2%), 1986 г. (13,6%) и 1990 г. (13,4%). Еще чаще изменчивость наблюдалась у вибрионов Эль-Тор серова­ра Гикошима, но число штаммов этого серовара было отно­сительно небольшим.

Анализ частоты изменчивости вибрионов Эль-Тор, выде­ленных из окружающей среды в различных регионах СССР с 1982 по 1991 г., представлен в табл. 66. Снижение агглюти- набельности холерными диагностическими сыворотками реже всего наблюдалась у вибрионов Эль-Тор, выделенных в Си-

Частота изменчивости вибрионов Эль-Тор, выделенных из объектов окружающей среды с 1982 по 1991 г.

Таблица 65

Частота изменчивости у вибрионов Эль-Тор разных сероваров, выделенных в СССР в 1982—1991 гг.

Частота изменчивости вибрионов Эль-Тор, выделенных в 1982—1991 гг.

бири и на Дальнем Востоке (4,5%) и чаще всего — в Тад­жикской (25,1%) и Казахской CCP (14,2%). В то же время RO-варианты чаще всего выявлялись в Сибири и на Дальнем Востоке (28%), реже — в Казахской, Таджикской и Узбек­ской ССР. В других регионах они обнаруживались очень ред­ко — 0,2—0,3% или не обнаружены совсем (Туркменская ССР).

Устойчивость к диагностическому фагу Эль-Тор часто встре­чалась у вибрионов, выделенных из окружающей среды на европейской территории СССР, в Казахской CCP и Средней Азии (61,9—89,7%), реже — на Кавказе (48,5%), в Сибири и на Дальнем Востоке (30,8%).

Из объектов окружающей среды в различных регионах стра­ны наряду с подвижными выделяли слабоподвижные или неподвижные варианты вибрионов Эль-Тор [Стогова А.Г. и др., 1979; Уралева В.С. и др., 1988; Пинигин А.Ф. и др., 1989].

В табл. 67 представлены данные И.В.Домарадского и соавт. (1972); М.С.Дрожевкиной и соавт. (1973); Р.М.Саямова и соавт. (1979); А.А.Кюрегян и соавт. (1982—1989) об обнаружении в отдельные годы вибрионов Эль-Тор, не продуцирующих индол.

В 1971 г. индолнегативные варианты вибрионов Эль-Тор, выделенных от людей в Казахской ССР, составили 9,4%, а в

Таблица 67

Частота обнаружения вибрионов Эль-Тор, не продуцирующих индол

объектах окружающей среды на территории Молдавской CCP в 1978 г. такие варианты составили 4,7%. По данным В.В. Алек­сеенко и соавт. (1989), на территории Украинской CCP ин­дол отрицательные штаммы от людей были выделены в 1973 г. (4 из 8) и в 1974 г. (44 из 88) и составляли половину всех изолированных вибрионов Эль-Тор. Из окружающей среды такие культуры выделены в 1974 г.

В Сибири и на Дальнем Востоке [Пинигин А.Ф. и др., 1990] не образующие индол штаммы вибрионов Эль-Тор из окру­жающей среды за период с 1973 по 1988 г. составили 4,9%. В то же время в целом по СССР из 8818 штаммов, выделен­ных в 1982—1989 гг. из объектов окружающей среды, не об­разовывали индол всего 1,4%. При этом 96 из 122 штаммов были выделены в 1982—1983 гг. и всего 26 — в последующие 6 лет.

Характеристика вибрионов Эль-Тор по образованию серо­

водорода представлена в табл. 68 [Домарадский И.В. и др., 1972; Дрожевкина М.С. и др., 1973; Мединский Г.М. и др., 1978; Саямов Р.М. и др., 1979; Кюрегян А.А. и др., 1989]. Образующие сероводород вибрионы на некоторых территори­ях выделяли от людей с частотой до 5,8% (Казахская ССР) и 30,6% (РСФСР) от общего числа изученных. Следует отме­тить, что в РСФСР они были выделены от людей в основном в Поволжье — Волгограде, Горьком — и составили более по­ловины всех изученных штаммов, а в Ульяновске и Кирове — 100 %.

Таблица 68

Частота обнаружения вибрионов Эль-Тор, образующих сероводород

В 1975—1978 гг. на ряде территорий РСФСР, Украинской, Белорусской и Молдавской CCP сероводородобразующие виб­рионы Эль-Тор выделяли из объектов окружающей среды чаще, чем от людей (9,0 и 2,6% соответственно). В 1982—1989 гг. такие штаммы обнаруживали в СССР в окружающей среде только в 0,3% случаев.

Имеются сведения о выделении вибрионов Эль-Тор, не расщепляющих крахмал. В 1970—1981 гг. такие штаммы отно­сительно часто выделяли от больных холерой людей (табл. 69), значительно реже — от вибриононосителей. Из объектов окру­жающей среды в 1971 — 1981 гг. их выделяли в 2,3—3,1%, а в 1982—1991 гг.—в 11,8% случаев [Кюрегян А.А. и др., 1982— 1991].

Частота встречаемости штаммов вибриона Эль-Тор, не ферментирующих крахмал

В 80-е годы крахмалнегативные варианты вибрионов Эль- Тор в объектах окружающей среды выделяли в основном в Туркменской CCP (64,3%), в Астраханской области (30,7%) и Каракалпакской ACCP (19,0%). Не исключено, что на указан­ных территориях имело место распространение своеобразного экологического варианта вибриона Эль-Тор.

У вибрионов Эль-Тор наблюдалась изменчивость и других биохимических свойств. В Украинской CCP в 1974 г. были выделены из сточных вод 1 штамм, не обладающий декарбок­силазой лизина, 2 штамма, имеющих дигидролазу аргинина, и по 1 штамму вибриона Эль-Тор от людей и из окружающей среды, не дающих реакцию на индофенолоксидазу.

В.Л. Семиотрочев и соавт. (1970) обнаружили 3 штамма вибрионов Эль-Тор от вибриононосителей, ферментировав­ших арабинозу.

Д.Л. Шмеркевич и соавт. (1979) выделили из воды поверхно­стных водоемов вибрионы Эль-Тор, атипичные по отношению к аминокислотам: 4 штамма не обладали декарбоксилазой ли­зина, 3 — имели гидролазу аргинина и у 2 штаммов сочетались оба этих признака изменчивости. Указанные штаммы различа­лись по степени агглютинабельности диагностическими холер­ными сыворотками, фаголизабельности и вирулентности и име­ли другие признаки изменчивости. При хранении на питатель­ных средах через 2—3 мес у 4 штаммов восстанавливалась спо­собность декарбоксилировать лизин. Авторы расценивают данную изменчивость как результат воздействия неблагоприятных эко­логических факторов. А.Ф. Пинигин и соавт. (1989) также на­блюдали восстановление продукции декарбоксилазы лизина после пассажей вибрионов Эль-Тор на питательных средах.

В 1982—1989 гг. из окружающей среды на различных терри­ториях СССР были выделены 11 маннитнегативных штаммов вибриона Эль-Тор, 3 — сахарозонегативных, 14 — лишенных протеолитической активности (табл. 70). Девять штаммов виб­рионов Эль-Тор не имели лизиндекарбоксилазы, 41 — орни­тинде карбокси л азы. В 1985 г. выделено 10 штаммов, ферменти­рующих лактозу, и 8 — инозит. Частота выделения вибрионов Эль-Тор, атипичных по указанным биохимическим призна­кам, была очень низкой — от 0,03% (сахарозонегативные) до 0,46% (лишенные орнитиндекарбоксилазы).

Таблица 70

Данные о некоторых редких отклонениях биохимической активности вибрионов Эль-Тор, выделенных из объектов окружающей среды

Отрицательная реакция Фогеса—Проскауэра обнаружена у 7,8% из 1950 штаммов вибриона Эль-Тор, выделенных от людей в 1970—1971 гг. (табл. 71). При этом в РСФСР такие культуры в основном выделяли на Волге, особенно в Астраханской и Волгоградской областях (9,1 и 11,9% соответственно), однако они были обнаружены также в Ленинграде, Ростове-на-Дону, а также в Украинской CCP (Киев, Херсон), в Белорусской CCP (Минск), Молдавской CCP (Кишинев), Казахской CCP (Алма-Ата, Гурьев).

В 1973—1977 гг. в Украинской CCP культуры вибрионов Эль-Тор от людей, не образующие ацетилметилкарбинол, составили 6,2%. В объектах окружающей среды такие вибрио­ны встречались редко — всего 4 штамма с отрицательной ре­акцией Фогеса— Проскауэра из 343 изученных (1,2%). В 1982— 1989 гг. в целом по СССР частота встречаемости таких вибри­онов Эль-Тор составила 0,8%.

О.В. Осауленко и соавт. (1988) привели данные о том, что среди вибрионов Эль-Тор, выделенных из объектов окружаю-

Частота обнаружения вибрионов Эль-Тор, не образующих ацетилметилкарбинол (AMK)

щей среды (вода поверхностных водоемов, ил, сточные воды) на благополучных по холере территориях, чаще, чем среди вибрионов Эль-Тор от больных людей, встречаются штаммы с низкой нейраминидазной активностью, которая рассматри­вается в качестве одного из факторов вирулентности.

И.И. Онацкий (1982) сообщил об обнаружении 2 штаммов вибриона Эль-Тор, выделенных из окружающей среды, ти­пичных по всем свойствам, но обладающих способностью к свечению. Оба штамма до титра агглютинировались О-холер- ной и Огава сыворотками, лизировались диагностическим фагом Эль-Тор, продуцировали ацетилметилкарбинол, были гемолитичными.

Представляет интерес распространение вариантов вибрио­нов Эль-Тор, агглютинирующихся только RO-холерной сыво­роткой. В табл. 72 приведены данные о таких штаммах, выде­ленных из объектов окружающей среды в 1986—1991 гг., ког­да их обнаруживали относительно часто. В этот период было выделено 442 штамма на 17 административных территориях, главным образом из воды поверхностных водоемов (338), Каспийского моря (54), из сточных вод (46), питьевой воды (3) и ила (1). Наибольшее число RO-вариантов вибрионов Эль- Тор выделяли в течение 5 лет подряд (1987—1991) в Примор­ском крае (115 штаммов), Каракалпакской ACCP (103 штам­ма), г.Шевченко (88 штаммов), Душанбе (49 штаммов), в Магистаузской области Казахской CCP (33 штамма). Всего на этих территориях выделено 388 штаммов (85,5% от общего количества). В Уральской области RO-варианты обнаруживали 3 года (8 штаммов).

В Приморском крае в 1987—1990 гг. RO-варианты составили 52,6% от всех выделенных в эти годы вибрионов Эль-Тор, а в 1991 г. были выделены только такие штаммы. В Каракалпак­ской ACCP RO-варианты за указанный период составили 27,5% от всех штаммов вибриона Эль-Тор, в г.Шевченко — 67,7% от всех выделенных в 1988—1989 гг., и в Душанбе в 1986 г.— 50%.

Подавляющее число RO-вариантов вибрионов Эль-Тор было выделено на территориях, где отсутствовали заболевания людей холерой.

Большинство RO-вариантов вибрионов Эль-Тор были ге- молитичны (96,6%), устойчивы к диагностическому фагу Эль- Тор (73,4%), почти V₃лизировались в той или иной степени фагом ХДФ₅. Лишь небольшая часть (6,1%) в низком титре агглютинировалась типоспецифическими или О-холерными сыворотками.

Ген vet обнаружен только у 13 из 171 изученных штаммов (4,1%), в том числе у 11 из 20, выделенных в Мангистаузской области в 1987 г., у 1 штамма из Кзыл-Ордынской и 1 — Курган-Тюбинской областей. Большинство изученных RO-ва- риантов были невирулентны.

Выделение на ряде территорий RO-вариантов вибрионов Эль-Тор следует расценивать как следствие изменчивости. Это согласуется с мнением А.Ф. Пинигина и соавт. (1989), которые считают RO-варианты, выделяемые в Приморском крае из водоемов, экологическим вариантом вибрионов Эль-Тор.

Л.М. Смоликова и соавт. (1977) сообщили о выделении из речной воды 3 культур холерных вибрионов в L-форме. Все они имели основные свойства вибрионов, но первоначально плохо агглютинировались холерными диагностическими сыво­ротками и не лизировались диагностическим фагом Эль-Тор. Полученные при пассажах на питательных средах ревертанты

Характеристика RO-вариантов вибрионов Эль-Тор, выделенных

Знаменатель — число изученных штаммов.

из объектов окружающей среды в 1986—1991 гг.

штаммов

агглютинировались RO-холерной сывороткой, а один —также О- и Инаба сыворотками. Лизабельность холерными диагнос­тическими фагами не восстановилась.

Ю.М. Ломовым и соавт. (1984, 1985) в воде Дона и в при­донном иле обнаружили еще 2 штамма вибриона Эль-Тор в L-форме. Один штамм агглютинировался до ½ титра О- и Огава холерными сыворотками, был гемолитичен, не лизиро­вался диагностическими холерными фагами, не вызывал син­дрома холерогенности. После пассажей на питательных средах он стал агглютинироваться до титра сывороток, но лизабель­ность фагами не восстановилась. Второй штамм не агглютини­ровался холерными диагностическими сыворотками и не ли­зировался холерными фагами, был негемолитичен. В дальней­шем он стал вести себя как типичный по всем свойствам холерогенный вибрион Эль-Тор.

Приведенные выше сведения по характеристике вибрионов Эль-Тор различного происхождения, выделенных в СССР в период VII пандемии, свидетельствуют о неоднородности их популяции по фенотипическим признакам, прежде всего по серологическим свойствам, гемолитической активности, чув­ствительности к фагам и вирулентности. При этом, несмотря на наличие отклонений по отдельным признакам, подавляю­щее большинство выделенных от людей вибрионов Эль-Тор оказались типичными по родовым и видовым свойствам — холерогенными и негемолитичными вариантами. Из объектов окружающей среды также имело место выделение холероген­ных негемолитичных штаммов этих микроорганизмов. Однако основное их количество было представлено гемолитичными, нехолерогенными штаммами, хорошо агглютинирующимися холерными диагностическими сыворотками, часто устойчи­выми к диагностическому фагу Эль-Тор и фагам ХДФ, а иногда с другими признаками изменчивости. Количество штам­мов таких вибрионов Эль-Тор в отдельные годы достигало 90,0% и более.

Вопрос о происхождении и эпидемической значимости гемолитичных нехолерогенных вибрионов Эль-Тор дискутиру­ется в мире давно. Отдельные отечественные исследователи считают такие штаммы измененными формами типичных вибрионов Эль-Тор, сапрофитизирующимися при попадании от человека в окружающую среду и более приспособленными к существованию в воде поверхностных водоемов и других объектах [Наркевич М.И. и др., 1984; Беляков В.Д. и др., 1986; Голубев Б.П. и др., 1988; Наркевич М.И. и др., 1991; Mapa- мович А.С., Пинигин А.Ф., 1992, и др.].

Согласно другой точке зрения, такие вибрионы постоянно существуют на территории бывшего СССР и, по мнению ряда исследователей, представляют собой эпидемически не опас­ную аутохтонную виброфлору водоемов [Коробкова Е.И.,

Зотова P.C., 1970; Иванов В.А. и др., 1971; Сергиев В.П. и др., 1981; Семиотрочев В.Л., Ривкус Ю.З., 1988; Святой В.И. и др., 1991; Грижебовский Г.М. и др., 1992; Зыкин Л.Ф., Яков­лев А.Т., 1993, и др.].