3. Выделение ДНК и РНК из клеточных культур.
Замороженный материал переносили в раствор ГТЦ и гомогенизировали 4-5 ударами в гомогенизаторе Даунса. Гомогенат прогревали при 55°С в течение 5 мин, наслаивали на подушку 5.7 М CsCl и центрифугировали при 30 тыс.
об/мин при 18°С в течение 18 ч с использованием ротора SW50 (Beckman). После центрифугирования фракцию, несущую клеточную ДНК и находящуюся на поверхности цезиевой "подушки", переносили в стеклянные пробирки, а оставшееся содержимое роторных пробирок сливали. Осадок РНК, находящийся на дне пробирок, растворяли в бидистиллированной воде и переосаждали ацетатом№ рН 5.0 - этанолом (см. "Материалы и методы", п. 13).
х
К фракции ДНК добавляли 4 объема буфера 1 STE - 1% SDS. Затем добавляли равный объем смеси хлороформ - изоамиловый спирт (24:1) и экстрагировали ДНК 5 мин. После разделения фаз центрифугированием отбирали верхнюю фазу и процедуру повторяли. Затем ДНК осаждали 3
объемами этанола и центрифугировали при 20 тыс. об/мин при 4°С. Осадок
х
ДНК промывали 75% этанолом на 1 STE, высушивали и растворяли в бидистиллированной воде.
Еще по теме 3. Выделение ДНК и РНК из клеточных культур.:
- Ингибиторы синтеза белка и клеточного деления, образующие аддукты ДНК и РНК.
- Как избежать контаминации и деградации РНК и ДНК
- 13. Переосаждение ДНК (РНК).
- Выделение РНК (задача 1)
- 9.4. Выделение плазмидной ДНК.
- 11.4. Гибридизация ДНК (РНК), иммобилизованной на мембране.
- ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 2 Тема: Выделение ДНК из крови
- Выделение бактериальной ДНК
- Б. Ингибирование ДНК- и РНК-полимеразы.
- 4. Выделение ДНК из лейкоцитов.
- ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №3 Тема: Выделение ДНК на сорбент из крови
- Выделение чистых культур
- Выделение и получение очищенных препаратов рибонуклеозидов из гидролизатов РНК
- Задача 1. Выделение суммарной РНК
- ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №4 Тема: Выделение ДНК из мочи, секрета простаты, слюны, глазной жидкости
- Ингибиторы синтеза белка, не образующие аддукты ДНК и РНК
- ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №5 Тема: Аплификация образцов выделенной ДНК
- Выделение чистой культуры из одной клетки
-
Детская онкология -
Кардиоонкология -
Лечение онкологических заболеваний -
Онкогастроэнтерология -
Онконефрология -
Паллиативная медицина -
-
Акушерство и гинекология -
Анатомия -
Андрология -
Биология -
Болезни уха, горла и носа -
Валеология -
Ветеринария -
Внутренние болезни -
Военно-полевая медицина -
Восстановительная медицина -
Гастроэнтерология и гепатология -
Гематология -
Геронтология, гериатрия -
Гигиена и санэпидконтроль -
Дерматология -
Диетология -
Здравоохранение -
Иммунология и аллергология -
Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация -
Инфекционные заболевания -
Информационные технологии в медицине -
История медицины -
Кардиология -
Клинические методы диагностики -
Кожные и венерические болезни -
Комплементарная медицина -
Лучевая диагностика, лучевая терапия -
Маммология -
Медицина катастроф -
Медицинская паразитология -
Медицинская этика -
Медицинские приборы -
Медицинское право -
Наследственные болезни -
Неврология и нейрохирургия -
Нефрология -
Онкология -
Организация системы здравоохранения -
Оториноларингология -
Офтальмология -
Патофизиология -
Педиатрия -
Приборы медицинского назначения -
Психиатрия -
Психология -
Пульмонология -
Стоматология -
Судебная медицина -
Токсикология -
Травматология -
Фармакология и фармацевтика -
Физиология -
Фтизиатрия -
Хирургия -
Эмбриология и гистология -
Эпидемиология -