5. Рестрикция геномной ДНК.
Для рестрикции геномной ДНК мы использовали два типа эндонуклеаз рестрикции (далее рестриктазы - табл.1). На первом этапе определенное количество ДНК из нормальной и опухолевой тканей инкубировали с рестриктазой, не содержащей в составе своего сайта рестрикции CpG динуклеотиды.
Затем отбирали половину или одну треть обработанной таким образом ДНК и добавляли к ней рестриктазу, чувствительную к статусу метилирования CpG динуклеотидов в составе своего сайта рестрикции. В дальнейшем аликвоту рестрицированной ДНК использовали в реакции амплификации. Все рестриктазы использовали с 5 кратным избытком (1 мкг ДНК - 5 ед. фермента) и инкубировали с ДНК в течение 14-16 ч. В случае метилчувствительных рестриктаз обработку проводили в два этапа, с добавлением на втором этапе половины первоначального количества фермента и инкубированием в течение 3-4 ч.
Еще по теме 5. Рестрикция геномной ДНК.:
- Геномные мутации
- Направленное клонирование фрагмента ДНК
- 10.1. Электрофоретическое разделение ДНК в агарозном геле.
- 6. Бисульфитная модификация ДНК.
- 11.1. Перенос ДНК на нейлоновую мембрану.
- Репликация ДНК
- Строение и функции ДНК
- Распространение метилирования ДНК.
- 13. Переосаждение ДНК (РНК).
- Нарушение механизмов репарации ДНК
- 4. Выделение ДНК из лейкоцитов.
- 10. ДНК – материальная субстанция наследственности.
- Функция метилирования ДНК.
- Как избежать контаминации и деградации РНК и ДНК
-
Детская онкология -
Кардиоонкология -
Лечение онкологических заболеваний -
Онкогастроэнтерология -
Онконефрология -
Паллиативная медицина -
-
Акушерство и гинекология -
Анатомия -
Андрология -
Биология -
Болезни уха, горла и носа -
Валеология -
Ветеринария -
Внутренние болезни -
Военно-полевая медицина -
Восстановительная медицина -
Гастроэнтерология и гепатология -
Гематология -
Геронтология, гериатрия -
Гигиена и санэпидконтроль -
Дерматология -
Диетология -
Здравоохранение -
Иммунология и аллергология -
Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация -
Инфекционные заболевания -
Информационные технологии в медицине -
История медицины -
Кардиология -
Клинические методы диагностики -
Кожные и венерические болезни -
Комплементарная медицина -
Лучевая диагностика, лучевая терапия -
Маммология -
Медицина катастроф -
Медицинская паразитология -
Медицинская этика -
Медицинские приборы -
Медицинское право -
Наследственные болезни -
Неврология и нейрохирургия -
Нефрология -
Онкология -
Организация системы здравоохранения -
Оториноларингология -
Офтальмология -
Патофизиология -
Педиатрия -
Приборы медицинского назначения -
Психиатрия -
Психология -
Пульмонология -
Стоматология -
Судебная медицина -
Токсикология -
Травматология -
Фармакология и фармацевтика -
Физиология -
Фтизиатрия -
Хирургия -
Эмбриология и гистология -
Эпидемиология -