10.2. Электрофоретическоеразделение РНК в агарозном геле.

Разделение РНК проводили в горизонтальном 0.8% агарозном геле в 2 BE в присутствии формальдегида и бромистого этидия. Для получения геля соответствующее количество агарозы ("Sigma", США) и буфера ВЕ нагревали в небольшом количестве дистиллированной воды до полного расплавления агарозы.

формальдегида, бромистый этидий до конечной концентрации 0.2 мкг/мл и дистиллированную воду, перемешивали и заливали в кювету для геля. Перед нанесением образцы исследуемой РНК переосаждали с использованием 3М ацетата натрия - 96% этанола (см. п. 13) и растворяли в 20 мкл смеси, содержащей 50% формамид, 2 BE буфер, 7% формальдегид и бидистиллированную воду. Затем пробы инкубировали при 55оС в течение 15 мин, охлаждали в ледяной бане в течение 5 мин и наносили в гель, предварительно смешав с буфером для нанесения (9:1, о/о). Электрофорез проводили при напряженности электрического поля 3-4 В/см в течение 3-4 ч. Результаты протоколировали с помощью фотографирования геля. В дальнейшем фракционированную РНК переносили на нитроцеллюлозную мембрану и использовали в блот-гибридизации.