Индукция цитотоксичности и апоптоза в клеточных линиях меланом при комбинировании фактора некроза опухоли (альнорин) с противоопухолевыми препаратами

Бигвава Х.А., Славина Е.Г., Черткова А.И., Заботина Т.Н., Борунова А.А., Кадагидзе З.Г.

РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН, г.Москва

Задача исследования: Изучить взаимодействие in vitro отечественного рекомбинантного препарата фактора некроза опухоли альфа — альнорина (Ал) с противоопухолевыми препаратами, применяемыми для лечения злокачественной меланомы, в индукции цитотоксического действия и апоптоза в клеточных линиях меланом.

Материалы и методы: В исследование включены 6 линий меланом человека - mel MTP, mel Il, mel Ras, mel P, mel Is, mel Kor, полученные из операционного материала больных; противоопухолевые препараты – дакарбазин (DTIC) и кармустин (BCNU). Цитотоксическую активность оценивали с использованием МТТ-теста, а апоптоз — методом окрашивания фиксированных клеток пропидиумом иодида (PJ) и методом двойного прижизненного окрашивания с использованием Аннексина V-FITC в комбинации с PJ с последующим анализом на проточном цитофлуориметре FACScan (Becton Dickinson).

Результаты: При исследовании выявлено, что разные линии меланом в различной степени чувствительны к цитотоксическому действию химиопрепаратов. Клеточные линии - mel Il, mel MTP, mel Kor оказались резистентны к цитотоксическому действию DTIC, но при этом линии mel Il и mel MTP наиболее чувствительны к BCNU, а линии mel Ras, mel P, mel Is чувствительны к DTIC. Резистентными к BCNU являются линии mel Kor, mel P, mel Ras. Добавление Ал существенно повышало цитотоксичность DTIC в отношении резистентных линии и лишь в слабой степени в отношении чувствительных линии. Сходные закономерности обнаружены и для BCNU, Ал усиливал цитотоксическое действие BCNU только в отношении резистентных линий mel Ras, mel P и действовал очень слабо или вовсе не влиял на цитотоксичность препаратов на чувствительных линиях. DTIC слабо индуцировал апоптоз в клетках меланом резистентных к его цитотоксическому действию — mel Il и mel MTP. Ал в концентрации 500МЕ/мл усиливал индукцию апоптоза в клетках mel Il, а усиление апоптоза в клетках mel MTP Ал наблюдалось в концентрации 1,56 МЕ/мл; при более высоких концентрациях (500 и 50МЕ/мл) Ал сам индуцировал в этих клетках высокий уровень апоптоза. Клетки mel Ras и mel P были чувствительны к апоптозиндуцирующему эффекту DTIC и Ал его не усиливал. Ал не усиливал апоптоз, индуцированный BCNU ни на чувствительных, ни на резистентных линиях. Исследовали различия между клеточными линиями меланом по экспрессии апоптозрегулирующих белков CD95 (Fas), bcl-2, bax и активности ядерного транскрипционного фактора NF-kB.

Выводы: Было выявлено, что клетки меланом, происходящие от разных больных, отличаются различной чувствительностью к цитотоксическому и апоптозиндуцирующему действию противоопухолевых препаратов, и Ал усиливает эту чувствительность только на резистентных, но не на чувствительных линиях.