Хранение продуцентов тилозина и проведение поддерживающей селекции штаммов

Продуценты тилозина Str. fradiae хранят на скошенном агаре при температуре +4 °С — до 8 не­дель. При этом обычно отмечается, что в случае хранения продуцентов тилозина на агаризованных питательных средах наблюдается нестабильность признака антибиотикообразования.

Для хранения продуцентов тилозина может быть использовано замораживание культур при температуре - 20 °С, - 70 °С, в жидком азоте. Отмечается, что хранение продуцентов тилозина в за­мороженном состоянии более 6 недель приводит к снижению антибиотической активности.

Имеются указания на возможность хранения продуцентов тилозина в лиофильно высушенном состоянии.

Возможно также длительное (до 5 лет) хранение штаммов-продуцентов тилозина без снижения их продуктивности в виде вегетативной культуры в ферментационной среде при температуре +5 °С (табл. 2). Для полного восстановления антибиотической активности при этом способе хранения не­обходимо проведение нескольких последовательных рассевов культуры до отдельных колоний с отбором высокоактивных вариантов.

Для поддержания штаммов Str. fradiae может быть использован метод периодических пересе­вов на агаризованных средах №15 (% по массе): меласса — 0,5; крахмал — 0,5; соевая мука — 0,5; кукурузный экстракт — 0,5; (NH₄)₂SO₄ — 0,1; NaCl — 0,1; MgSO₄*7H₂O — 0,05; СаСО₃ — 0,2; агар — 1,5; pH среды до стерилизации 7,0-7,2), Гаузе-1 и Ваксмана. Однако многочисленные пас­сажи на агаризованных средах приводят к снижению продуцирующей способности культуры с од­новременным повышением коэффициента вариации. При повторных пересевах на жидкой среде антибиотическая активность культуры практически не снижается до 5-го пассажа (рис. 2).

Поддерживающую селекцию штаммов Str. fradiae — продуцентов тилозина с целью сохранения высокой антибиотической активности рекомендуется проводить с учетом их морфологических признаков на агаризованных средах.

Табл. 2. Влияние продолжительности хранения вегетативного материала штамма Str. fradiae 25А в ферментацион ной среде при температуре + 5‘С на величину его антибиотической активности

Рис. 2. Изменение антибиотической активности штаммов Str. fradiae 25 А (1) и Str. fradiae 165 (2) при повторных пассажах посевного материала на жидкой ферментационной (а) и агаризованной Лё 15 (б) питательных средах

отдельных колоний усиливает этот отличительный признак. Сделаны попытки создания штамма Str. fradiae, продуцента макролидного антибиотика тилозина, конститутивно устойчивого к эрит­ромицину и высоким дозам тилозина.

6.