Сывороточные иммуноглобулины

Метод радиальной иммунодиффузии в геле агарозы для количественного определения иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови (Галицкий Я.Д., 1987).

Приготовленный в лабораторных условиях вероналовый буфер (1,84 г веронала и 0,34 г едкого натра и 200 мл дистиллированной воды) смешивают с гелем агарозы (агароза 3,6 г), после чего кипятят в течение 10-15 мин.

Стеклянные пластины размером 9x12 см протирают эфиром, помещают на строго горизонтальную поверхность и подогревают. На середину пластины из цилиндра выливают расплавленный агар, содержащий моноспецифическую сыворотку. С помощью круглого штампа по трафарету в геле вырезают лунки. На одном стекле размером 9x12 см можно разместить до 48 лунок.

Исследуемую сыворотку вносят в лунки до исчезновения вогнутого мениска. Каждую сыворотку вносят в лунки агаровых пластин, содержащих ту или иную моноспецифическую сыворотку. В 4 лунки агаровой пластины вносят цельную и разведенную в 2, 4, 8 раз стандартную (эталонную) сыворотку с известным содержанием иммуноглобулинов всех классов.

После внесения исследуемых сывороток пластины помещают во влажную камеру и инкубируют в течение 24 часов (для определения Ig A и Ig G) или 48 часов (для определения Ig M). После инкубации пластины извлекают из влажной камеры и окрашивают красителем бромфеноловым синим.

Для оценки результатов реакции измеряют диаметр образовавшихся вокруг лунок колец преципитации. Затем на полулогарифмической бумаге наносят на оси абсцисс диаметры колец стандартной сыворотки, а по оси ординат – известную концентрацию каждого класса иммуноглобулинов в (г/л) и строят калибровочный график, с помощью которого вычисляют содержание иммуноглобулинов в каждой исследуемой сыворотке.