Тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест)
Метод основан на цитохимическом выявлении темно-синих гранул диформазана, которые образуются в цитоплазме нейтрофила в результате восстановления нитросинего тетразолия. Эти химические реакции осуществляются благодаря активации кислородзависимой биоцидности фагоцита (Маянский А.Н.
и соавт., 1999). Повышенный метаболизм лейкоцитов выступает как донатор электронов бесцветного раствора НСТ, трансформируя формазан в восстановленную форму в виде черных глыбок определяющихся в нейтрофилах крови (Герасимов И.Г., Калуцкая О.А., 2000).Мазки крови окрашивали дважды: по Паппенгейму (комбинация методов Мая-Грюнвальда и Романовского-Гимзы) и второй раз тетразолиевым нитросиним. В готовом мазке подсчитывали общее число нейтрофильных гранулоцитов и число нейтрофилов, содержащих зерна формазана. Результат выражали в процентном отношении числа активированных нейтрофилов к 100 клеткам нейтрофилов в мазке. Подобная реакция обозначается как спонтанный тест НСТ. Он улавливает такие отклонения в организме, которые не регистрируются общепринятыми лабораторными тестами и другими маркерами. Нарушение кислородзависимых механизмов совпадает с увеличением числа активированных нейтрофилов (Карпищенко А.И., 1999).
Механизм данного теста основан на том, что фагоцитирующие клетки в присутствии фагоцитированного антигена активируют цитоплазматические пищеварительные энзимы, способные разрушить данный антиген. Доказано, что поглощение НСТ является эквивалентом поглощения микробных тел. Как микробные АГ, так и НСТ в присутствии ионов галоидов (йода, брома, хлора) активизирует клеточный метаболизм, вызывает «респираторный взрыв», который сопровождается увеличением потребления кислорода, активизацией гексозомонофосфатного шунта, образованием перекиси водорода и свободных радикалов в нейтрофильных гранулоцитах. Это дало основание считать НСТ-тест показателем метаболической активности клеток, в частности нейтрофильных лейкоцитов и эквивалентом их фагоцитарной и бактерицидной активности (Зинкин В.Ю., Годков М.А., 2004).