ВЭЖХ-анализ синтетического A2E и продуктов его облучения

Как уже отмечалось выше, начальные пики при хроматографическом анализе хлороформного экстракта из ЛГ могут быть продуктами фотоокисления и фотодеградации А2Е (Фельдман и др., 2010).

Для выяснения природы продуктов фотоокисления А2Е был проведен масс- спектрометрический анализ растворов синтетического А2Е в ацетонитриле до и после облучения (Яковлева и др., 2006) (рис. 7). Показано, что после облучения помимо основного пика с отношением M/Z 592 (М+), соответствующего неокисленной форме молекулярного иона А2Е, появляются новые пики с M/Z 608, 624, 640 и 656, каждый из которых отличается от предыдущего по массе на 16 и соответствует окисленным формам A2E. По мере увеличения времени облучения количество

Рис. 6. Спектры поглощения синтетического А2Е в ацетонитриле

Кривая 1 до облучения видимым светом, кривая 2 после облучения видимым светом (Яковлева и др., 2006)

окисленных форм A2E растет по отношению к исходной неокисленой форме, о чем свидетельствует относительное увеличение интенсивности пиков с M/Z 608, 624, 640 и 656 по отношению к пику с M/Z 592. Образование нескольких новых окисленных форм А2Е хорошо согласуется с данными, полученными методом ВЭЖХ- анализа.

Мы провели сравнительный ВЭЖХ-анализ синтетического А2Е и продуктов его облучения (рис. 8). Исследование раствора А2Е до и после облучения показало, что при фотоокислении А2Е образуются, по крайней мере, два основных новых продукта (см. рис. 8Б, пики oxy-A2E). Не исключено также, что каждый из них может представлять собой смесь изомеров, или очень близких по своим свойствам веществ. На фоне образования этих новых продуктов наблюдается снижение количества А2Е, что является еще одним доводом, подтверждающим образование этих новых продуктов в результате химических реакций А2Е. На рис. 8 (А и Б - 1) представлены хроматограммы с детектированием по поглощению на длине волны 430 нм. На рис. 8 (A - 1) представлены данные ВЭЖХ-анализа синтетического А2Е. Относительное содержание А2Е и его изоформ в исследуемом образце составляет около 87% (табл. 2). После облучения этого образца белым светом в течение 2 часов на хроматограмме (рис. 8, Б - 1) появляются новые пики (oxy-A2E), соответствующие окисленным формам А2Е, идентифицированным в работе (Яковлева и др., 2006), а также других продуктов фотоокисления и фотодеградации А2Е, детектируемых на более коротких временах удерживания. Как видно из табл. 2, относительное содержание А2Е и его изоформ уменьшается до 10%.

Рис. 7. Масс спектры А2Е до и после облучения. (М) - основной пик А2Е, (М+О)+, (М+2О)+, (М+3О)⁺ (М+4О)+ - пики, соответствующие моно-, бис-, три-, тетра-окисленным продуктам А2Е (Яковлева и др., 2006)

На хроматограммах с детектированием по поглощению можно условно выделить три группы детектируемых веществ в хлороформном экстракте (см. рис. 8 А и Б - 1). Первая группа - это вещества (A2E_oxdeg), которые детектируются на самых ранних временах, включая продукты oxy-A2E. Мы предполагаем, что эти вещества могут быть продуктами фотоокисления и фотодеградации А2Е и ПТР-димера. Из этой группы мы идентифицировали продукты, обозначенные на рис. 8 (А и Б - 1) как oxy-A2E. Согласно масс-спектрометрическому анализу, эти продукты представляют собой эпокси и фураноидные продукты окисления А2Е, образованные при взаимодействии бисретиноида с одним или двумя атомами кислорода (Яковлева и др., 2006). Вещества второй группы - это А2Е и iso-A2E (Parish et al., 1998; Яковлева и др., 2006). В состав третьей группы (А2Е_шо