ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования

По статистическим данным, представленным в Государственном докладе «О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2013 году», в Российской Федерации зарегистрировано более 33 млн.

ОРВИ представляет собой гетерогенную группу заболеваний, этиологическими агентами которых являются респираторные вирусы, преимущественно поражающие эпителий верхних дыхательных путей (Оковитый С.В., 2011). Наиболее распространенным заболеванием данной группы является острый риносинусит, его вклад в структуре ОРВИ составляет до 80% (Зайцев А.А., 2009).

Согласно Европейским рекомендациям по риносинуситу (Fokkens W. J., 2012 г.), острый риносинусит - острое воспаление слизистой оболочки полости носа и придаточных пазух (появившееся внезапно и продолжающееся не более 12 недель), характеризующееся заложенностью носа и/или наличием выделений из носа или по задней стенке глотки. Понятие «острый риносинусит» охватывает широкий спектр различных нозологических состояний, начиная от банальной ОРВИ до тяжелой бактериальной инфекции. Около 5% ОРВИ осложняются острым бактериальным риносинуситом (Wang D. Y, 2011), при котором в 30% случаев назначаются антибактериальные препараты (Gill J. M., 2006).

Острый тонзиллит наряду с острым риносинуситом также является широко распространенным заболеванием. Острый тонзиллит - острое воспаление преимущественно небных миндалин, сопровождающееся их отеком, гиперемией, наличием экссудата, а также повышением температуры тела и реакцией периферических лимфатических узлов (Полякова А.С., 2014). В данное время установлено, что причиной острого тонзиллита в большинстве случаев является вирусная, а не бактериальная инфекция (Hsieh T.H., 2011), при этом системная

антибактериальная терапия в отношении вирусных тонзиллитов не эффективна (Полякова А.С., 2014).

На сегодняшний день наиболее широко применяемыми препаратами для лечения заболеваний верхних дыхательных путей являются антибактериальные препараты и нестероидные противовоспалительные средства (Н11ВС). Для эффективного лечения антибактериальными препаратами требуются дополнительные исследования, которые зачастую требуют времени, а использование Н11ВС влечет за собой развитие побочных эффектов. Поэтому сегодня остается актуальным поиск новых эффективных и безопасных лекарственных средств для лечения воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей.

В литературе широко представлено описание экспериментальных моделей аллергического и бактериального ринита, но отсутствует описание экспериментальных моделей асептического риносинусита и острого тонзиллита, что делает актуальным поиск новых экспериментальных методов для оценки эффективности лекарственных средств, используемых в терапии заболеваний верхних дыхательных путей (Руководство ..., 2012).

Степень разработанности темы исследования

Предлагаемые к изучению препараты фрешнос и КЛС-04 являются новыми лекарственными средствами. Растения, экстракты которых были использованы при создании препарата фрешнос, широко изучены и представлены в литературе. Однако сочетание экстрактов шалфея, травы тысячелистника обыкновенного, травы зверобоя продырявленного и побегов багульника болотного в виде назальных капель до настоящего времени не изучались. Эти растения широко известны своими противовоспалительными, антибактериальными, противовирусными и эндотелийпротекторными свойствами. Кроме того, в состав препарата входит мятное эфирное масло, которое широко применяется в препаратах, предназначенных для лечения воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей (Dicpinigaitis P.V., 2003, Pereira E. J. et al., 2013) и тимол, который часто применяется в комплексных препаратах как антисептическое

средство (Учайкин В.Ф. 2004, Руженцова Т.А., 2014). Таким образом, основными действующими веществами исследуемого препарата, являются летучие компоненты эфирных масел и флавоноиды, которые обеспечивают широкий спектр фармакологических эффектов данного препарата (Макарова М.Н., Макаров В.Г., 2010).

Новое лекарственное средство КЛС-04, представляет собой липидный комплекс, полученный по оригинальной технологии в соответствии с патентом РФ 2420213 (Шиков А. и др., 2012) из свежемороженой печени трески (Gadus morhua L.)в лекарственной форме спрея. Ранее были изучены инъекционная и наружная формы препарата на моделях воспаления: каррагениновый воздушный мешочек у крыс и контактный дерматит у мышей (Рыбакова А.В., 2012, Крышень К.Л., 2013). В этих работах было показано, что производные ω-3-

полиненасыщенных жирных кислот (резолвины, протектины), входящие в состав препарата, играют важнейшую роль в разрешении острого воспалительного процесса и действуют на несколько молекулярных мишеней, включая ЦОГ-2, 5- ЛОГ и H1-гистаминовые рецепторы.

Цели и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилась оценка эффективности новых препаратов природного происхождения фрешнос и КЛС-04 с использованием разработанных и валидированных моделей асептического острого риносинусита и острого шейного лимфаденита.

Задачи исследования:

1. Разработать и валидировать новую экспериментальную модель асептического острого шейного лимфаденита с учетом биохимических, гематологических, патофизиологических и патоморфологических показателей.

2. Разработать и валидировать новую экспериментальную модель асептического острого риносинусита на основании патофизиологических и патоморфологических параметров.

3. Оценить эффективность нового отечественного препарата в форме спрея КЛС-04, на экспериментальной модели острого шейного лимфаденита в сравнении с тантум верде, диклофенаком и дексаметазоном.

4. Оценить эффективность нового отечественного препарата фрешнос в форме капель назальных на экспериментальной модели острого риносинусита в сравнении с виброцилом и аквамарисом.

Научная новизна

Впервые разработаны и валидированы экспериментальные методы оценки эффективности лекарственных средств на моделях асептического воспаления верхних дыхательных путей. Показано, что для индукции острого шейного лимфаденита в качестве провоспалительного агента наиболее целесообразно использование липополисахарида клеточной стенки бактерий E.coli (ЛПС) в дозе 0,1 мг/кг и каррагенина в дозе 0,8 мг/кг, а для развития острого риносинусита - формалина в дозе 12 мг/кг. Доказано, что при формировании острого шейного лимфаденита патогенетически значимым является определение концентрации провоспалительного цитокина в крови экспериментальных животных TNF-α - через 4 ч от момента индукции патологии и уровня С-реактивного белка (СРБ) через 72 ч от момента индукции патологии.

Впервые осуществлена проверка эффективности применения разных доз нового противовоспалительного препарата КЛС-04 в форме спрея для купирования патологических процессов, сопровождающих развитие асептического лимфаденита, при этом доказаны преимущества применения КЛС- 04 в сравнении с тантум верде, диклофенаком и дексаметазоном. Также впервые в широком диапазоне доз проведена оценка противовоспалительной эффективности нового комплексного лекарственного препарата фрешнос на модели асептического острого риносинусита в сравнении с виброцилом и аквамарисом,

что позволило установить диапазон эффективных доз препарата для последующей клинической апробации.

Теоретическая и практическая значимость

Теоретическое значение работы состоит в апробации и валидации новых экспериментальных моделей острого шейного лимфаденита и острого риносинусита у крыс. Результаты экспериментального исследования препарата КЛС-04 вошли в досье на препарат для получения разрешения на проведение клинических испытаний. Досье на препарат фрешнос сформировано, проведены клинические испытания на базе отоларингологического отделения Городской клинической больницы №1 им. Н.И.Пирогова г. Москвы под руководством члена-корреспондента РАН профессора В.Т. Пальчуна и на базе ФГБУ «Санкт- Петербургский НИИ ЛОР» Минздрава России под руководством члена- корреспондента РАН профессора Ю.К. Янова.

Материалы диссертации вошли в учебные программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях кафедр фармакологии и биологии ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» МЗ РФ.

Методология и методы исследования

Эксперименты включали в себя разработку и валидацию новых фармакологических моделей острого шейного лимфаденита и острого риносинусита у крыс, а также оценку эффективности препаратов различных фармакологических групп в данных моделях.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработана новая экспериментальная модель острого шейного лимфаденита, которая инициируется путем введения под капсулу в мезенхимальную ткань шейных лимфатических узлов крыс растворов ЛПС в дозе

0,1 мг/кг или каррагенина в дозе 0,8 мг/кг. Экспериментальная модель острого шейного лимфаденита валидирована по показателям правильность (точность) и сходимость. Модель воспроизводима вне зависимости от времени года.

2. На разработанной и валидированной модели экспериментального острого шейного лимфаденита установлен противовоспалительный и противоотечный эффекты исследуемого противовоспалительного препарата КЛС-04.

3. Разработана новая экспериментальная модель острого риносинусита путем закапывания в носовую полость крыс раствора формалина в дозе 12 мг/кг. Экспериментальная модель острого шейного лимфаденита валидирована по показателю сходимость. Модель воспроизводима вне зависимости от времени года.

4. На разработанной и валидированной модели экспериментального острого риносинусита был установлен противовоспалительный эффект нового препарата растительного происхождения фрешнос, обусловленный входящими в состав препарата флавоноидами и терпенами.

Степень достоверности и апробация материалов исследования

Степень достоверности

Степень достоверности определяется достаточным количеством экспериментальных данных, полученных с использованием 530 крыс, применением современных методов рандомизации, включением в исследование интактной, контрольной групп и групп сравнения, сроками наблюдения, достаточными для экстраполяции полученных данных в клинику, выбором адекватных методов физиологического, биохимического и патоморфологического исследования, использованием современных методов медицинской статистики.

Апробация работы

Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на XIII Международном съезде «Phytopharm-2009» (Bonn, Germany, 07.2009), Межрегиональной конференции с международным участием, посвященной 100- летию кафедры биологической химии с курсом биоорганической химии (Санкт-

Петербург, Россия, 2009), Научно-практической конференции СПбГМА им. И.И.Мечникова Актуальные проблемы медицины и биологии (Санкт-Петербург, Россия, 2010 г), Международном съезде «Phytopharm-2013» (Vienna, Austria, 2013), Международном съезде «Phytopharm-2014» (Санкт-Петербург, Россия, 2014 г).

По теме диссертации опубликованы 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ, и 4 тезиса. Апробация диссертации прошла в ФГБВОУ ВПО «Военно­медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ.

Личный вклад автора в проведенное исследование и получение научных результатов

Исследования были выполнены на базе ЗАО «Санкт-Петербургский институт фармации». Автор лично осуществлял планирование экспериментов и их непосредственное выполнение (95%), статистическую обработку полученных результатов (100%), обсуждение (90%), написание статей, тезисов и докладов, диссертации и автореферата (95%).

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Работа изложена на 170 страницах машинописного текста, иллюстрирована 42 рисунками и 42 таблицами. Библиографический указатель содержит 172 наименования, в том числе 74 отечественных и 98 иностранных.