2.1 Материалы исследования
Животные В качестве объектов для воспроизводства пневмоцистной инфекции и накопления инфекционной биомассы были выбраны минисвиньи–отъемыши (авторское свидетельство № 1685991 «Способ получения биомассы P.
carinii»).Возбудители пневмоцистоза В работе были использованы Pneumocystis carinii, полученные при заражении минисвиней.
Вирусы Для накопления биомассы ЦМВ были использованы два штамма: штамм АD–169 и авторский штамм, выделенный нами у ребенка из г. Красноярска – «Весна» (патент № 769889). Вирусы были адаптированы к перевиваемым клеточным культурам диплоидных фибробластов кожно–мышечной ткани эмбриона человека и эмбриональных клеток человека. Инфекционную активность вируса определяли по прямому цитопатогенному действию (ЦПД) на указанных клеточных культурах; титры вируса составили 104 – 105 ТЦД 50/мл.
Культуры клеток
В экспериментах использовали перевиваемые культуры диплоидных клеток кожно-мышечной ткани человека (ДККМЧ).
Контингент обследованных лиц При анализе иммуноструктуры населения, на разных территориях России к P. carinii и ЦМВ было обследовано здоровое населения (дети и взрослые), в том числе доноры. Всего 1525 человек.
Для оценки значения пневмоцистоза и ЦМВИ в патологии обследовано 12128 человек, больных пневмониями, бронхо-легочными и другими заболеваниями.
С целью выяснения роли P. carinii и ЦМВ в патологии у лиц с иммунодефицитами различной природы обследованы следующие группы:
– ВИЧ–инфицированные и больные СПИДом дети и взрослые (617 человек), в КИБ №2 и поликлиническом отделении МГИ СПИД;
– больные гемобластозами (234 человека) в Российском научном центре гематологии;
– инъекционные наркоманы (39 человек);
– лица с заболеваниями желудочно–кишечного тракта (22 человека).
Контролем служили 168 доноров г. Москвы.
При анализе распространения P. carinii в организованных коллективах (закрытого и открытого) типов обследовано 610 детей и 663 взрослых.
Для определения роли ЦМВ в патологии беременных и новорожденных обследовано:
– здоровые женщины детородного возраста (102 человека);
– беременные (260 человек);
– женщины с отягощенным акушерским анамнезом (189 человек);
– ВИЧ–инфицированные беременные (76 человек);
– новорожденные и дети раннего возраста с диагнозом «внутриутробная инфекция» (125 человек).
В общей сложности при выполнении работы обследовано 16369 человек.
Таблица 1
Общий объем проведенных обследований (объекты, материалы и методы)
| № п/п | Объект исследования, материалы | Количество обследованных лиц | Выявляемые Маркеры | Используемые методы |
| 1. | Здоровое население разных территорий России (дети и взрослые, в т.ч. доноры) Сыворотки крови | 1525
| Антитела к P.carinii и ЦМВ классов IgG и IgM | НРИФ, ИФА |
| 2. | Больные с острыми пневомниями, бронхолегочными и другими патологическими состояниями. Сыворотки крови, ликвор, моча, слюна (1994-2001) | 12128 | Репликация ЦМВ в культуре клеток, антигены ЦМВ. Антитела к ЦМВ классов IgG и IgM. Пневмоцисты и трофозоиты, антитела к P.carinii класов IgG и IgM. | Культура клеток, НРИФ и ИФА НРИФ, ИФА |
| 3. | ВИЧ-инфицированные и больные СПИДом, проодившие лечение в КИБ№2 г. Москвы и поликлиническом отделении МГИ СПИД. Сыворотки крови, мочи, ЛПК. (1993 –1999) |
617 | Репликация ЦМВ в культуре клеток, антигены ЦМВ. ДНК ЦМВ в крови, ликоре. Антитела классов IgG и IgM к ЦМВ и P.carinii. Пневмоцисты и трофозоиты.
| Культура клеток, НРИФ, ИФА, ПЦР Паразитологический, НРИФ, ИФА |
| 4. | Больные гемобластозами, проходиышие лечение в РНЦ Гематологии г. Москвы (1997 –2001). Сыворотки крови, ликвор, БАЛ, ИМ. | 234 | Репликация ЦМВ в культуре клеток, антигены ЦМВ. Антитела к ЦМВ и P.carinii классов IgG и IgM. Пневмоцисты и трофозоиты.
| Культура клеток, НРИФ, ИФА. Паразитологический, НРИФ, ИФА |
| 5. | Инъекционые наркоманы. Сыворотки крови. | 34 | Антитела к ЦМВ классов IgG и IgM.
| НРИФ, ИФА |
| 6. | Лица с заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Сыворотки крови. | 22 | Антитела к ЦМВ классов IgG и IgM.
| НРИФ, ИФА |
| 7. | Дети из закрытых коллективов (дом ребенка). Сыворотки крови. | 196 | Антитела к P.carinii класов IgG и IgM.
| ИФА |
| 8. | Дети из открытых коллективов (посещающие детские дошкольные учреждения). Сыворотки крови. | 240 | Антитела к P.carinii класов IgG и IgM. | ИФА |
| 9. | Дети “не Организованные”. Сыворотки крови. | 174 | Антитела к P.carinii класов IgG и IgM. | ИФА |
| 10. | Организованные коллективы взрослых закрытого типа системы МВД. Сыворотки крови. | 447
| Антитела к P.carinii класов IgG и IgM. | ИФА
|
| 11. | Здоровые женщины детородного возраста. Сыворотки крови. | 102 | Антитела к ЦМВ класов IgG и IgM. | ИФА |
| 12. | Беременые женщины. Сыворотки крови. | 260 | Антитела к ЦМВ класов IgG и IgM. | ИФА |
| 13. | Женщины с отчгощенным акушерским анамнезом. Сыворотки крови. | 189 | Антитела к ЦМВ класов IgG и IgM. | ИФА |
| 14. | Беременные ВИЧ-инфицированные. Моча, сыворотки крови. | 76
| Антитела к ЦМВ класов IgG и IgM. Антигены ЦМВ | НРИФ, ФИА |
| 15. | Новорожденные и дети раннего возраста с диагнозом “внутриутробная инфекция”. Моча, сыворотки крови. | 125 | Антитела к ЦМВ класов IgG и IgM. Антигены ЦМВ | НРИФ, ИФА |
| ИТОГО: | 16 369 | |||
Еще по теме 2.1 Материалы исследования:
- 2.1 Материалы и методы экспериментального исследования
- Материалы и методы исследования
- Материалы исследования
- Материалы для исследования:
- Материалы исследования
- Материалы исследования.
- Материалы исследования
- Материалы и методы исследования
- Материалы и методы экспериментальных исследований
- Глава 2. Материалы и методы исследования
- Материалы исследования
- Материалы исследования
- Материалы и методы исследований
- Материалы и методы исследования
- Статистическая обработка материалов исследования
- 2.2 Материалы и методы клинического исследования