2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены на 73 самках свиней крупной белой породы шести возрастных групп.

Для изучения влияния выгульного и безвыгульного содержа­ния на развитие половых органов и их васкуляризацию в совхозе "Аркадакский", Аркадакского района, Саратовской области были сформированы по принципу аналогов опытная и контрольная группы по 33 свинки двухмесячного возраста.

Контрольная группа свинок содержалась в станках по 10-16 голов и пользовалась моционом на выгульных двориках (площадках) по 1,5-2,0 часа утром и вечером. Опытная группа свинок содер­жалась в том же помещении, в станках по 10-16 голов, но нахо­дилась в условиях ограниченной подвижности, достигавшейся их безвыгульным содержанием.

При выборе норм двигательной активности учитывали те воз­можности и приёмы содержания, которые наиболее широко применя­ются в практике промышленного свиноводства, а также руководст­вовались данными литературы по биологии и физиологии свиньи, по способам их выращивания (А.Д.Слоник, 1971; А.И.Карелин, 1979; В.Г .Козловский и др., 1979; Я.Козумплик, 1983; У.Д.Понд и К.А.Хаупт, 1983).

Кормление животных обеих групп было одинаковым. Рационы составлялись по нормам ВИЖа и были сбалансированны по кормо­вым единицам, переваримому протеину, кальцию и фосфору.

Материал для морфологических исследований был взят от 3 постановочных свинок, 24 контрольных и 24 опытных свиней раз­личного возраста. Кроме того, по 2 свинки из контрольной и опытной группы были убиты в восемнадцатимесячном возрасте после опороса и отъёма от них поросят.

У девяти свиноматок в каждой группе определяли уровень тканевого кровотока в половых органах в десятимесячном возра­сте и перед осеменением (II—12 месяцев).

Все свиноматки во время беременности содержались в одина­ковых условиях и пользовались моционом. За две недели до опо­роса их переводили в индивидуальные станки на безвыгульное содержание. После получения потомства определяли продуктив­ность свиноматок, учитывая при этом количество поросят в помё­те, вес гнезда при рождении и к отъёму, а также процент сохран­ности.

Сводные данные о материале и методах исследования по возрастным группам у подопытных животных представлены в таб­лице 2.1.

Анатомическое препарирование. Для исследования от убитых животных отпрепарировали целиком половые органы с питающими их сосудами, захватывая участок брюшной аорты и каудальной полой вены. У двухмесячных животных брали целиком тазовую полость.

Препарирование артерий и вен осуществляли при помощи обыч­ных анатомических инструментов. Для более детального изучения

Таблица 2.1

Итого

12 22 24 46 66 66 236

Характеристика материала по возрастным группам и методам исследования у подопытных животных

мелких объектов, вскрытия вен и изучения их клапанного аппара­та применяли: глазные скальпели и пинцеты, препаровальные иглы, бинокулярную лупу (БЛ-2).

Препарирование сосудов проводилось с предварительной их инъекцией застывающей контрастной массой и рентгенографией.

По данным этих методов определяли места отхождения или впаде­ния магистральных сосудов, топографию, количество ветвей, тип ветвления, наличие коллатералей и анастомозов, длину и попереч­ник сосудов, расположение и количество клапанов б венах.

Длину сосудов предварительно определяли ниткой, а затем отмеченный участок нитки измеряли на линейке. Поперечник сосу­да высчитывали по формуле

■ к

где С - длина окружности, а - константа (3,14).

При изучении клапанного аппарата вен использовали методы, предложенные В.Г .Украинским (1958) и А.В.Комаровым (1961,1975). Для обнаружения клапанов отпрепарированные вены вскрывали по всей длине, подсчитывали количество клапанов, измеряли расстоя­ние между ними, определяли количество и расположение створок. Затем вычисляли клапанный индекс по формуле:

к_

Д ’

где КН- клапаїпшй индекс;

К - общее количество клапанов;

П - длина вены в мм.

Морфометрию половых органов проводили следующим образом. Яичники измеряли по длине от труб ного до маточного конца, по ширине и толщине в средней части органа. Подсчитывали количество видалых на поверхности яични­ка фолликулов, а у половозрелых свиней и число жёлтых тел. Измеряли величину фолликулов и жёлтых тел, описывали форму яичников и внешний вид. Яичники взвешивались на аналитических весах марки ВЛКТ - 500 с точностью до 0,01 г.

Определяли длину яйцепровода и степень извилистости, его диаметр в ампулярной, средней и истмической частях.

Рога, тело и шейку матки измеряли по длине и диаметру. Диаметр измеряли в средней части указанных отделов матки.

Длину тела и шейки матки измеряли штангенциркулем. Длину рогов матки, как и яйцепроводов, предварительно определяли ниткой по большой кривизне, а затем известный участок нитки измеряли на линейке.

Гистологический метод исследования позволил изучить толщину и структуру оболочек стенки рогов матки и яйцепроводов, микроморфологию тканей яичников.

Для исследования брали кусочки из средней части рогов матки; истмической, средней и ампулярной частей яйцепроводов; целиком яичник. Фиксацию взятого материала производили в 10% растворе нейтрального формалина. Срезы делали на замораживаю­щем мшфотоме толщиной 15-20 мкм и окрашивали гематоксилин- эозином или по способу Ван-Гизона. Полученные препараты изуча ли под микроскопом МБР-3. Все необходимые измерения производи­ли винтовым окулярным микрометром. Подсчет срезов маточных желез на гистопрепаратах рога матки делали по J.Erices , U. Schnurrhusch (1979).

Метод рентгенографии артерий и вен сочетали с их препарированием. Техника этого метода исследова­ния заключалась в следующем. Половые органы раскладывали в кювете, а в питающие их магистральные артерии и вены вставля­ли канюли. Для получения рентгеновского изображения сосудов, они заполнялись через канюли застывающими рентгеноконтрастны­ми массами. В большинстве случаев использовали смесь свинцово­го сурика с 8% раствором желатина в соотношении 1:4 весовых частей или смесь сурика с латексом в том же соотношении 0.1 .Г. Привес, 1952). Объект перед инъекцией сосудов погружали в теп­лую воду, а после инъекции - в холодную воду на 5-Ю минут, до застывания рентгеноконтрастной массы.

У двухмесячных свинок канюлю вставляли в брюшную аорту и через нее заполняли все сосуды тазовой полости контрастным веществом. После этого извлекли половые органы и делали рент­генографию.

Рентгенографию сосудов производили экспериментальным рентгенаппаратом 12.П.6. - "ГАЗЕЛЬ" (рис. 2.1) при следующих режимах: сила тока 5 їла, напряжение - 35 кв, фокусное расстоя­ние - 50 см, экспозиция 10-15 сек. Снимки делали на рентгенов­скую пленку типа PM-І, чувствительностью 550 S 0,85р“*. Кассе­ты для рентгеновских пленок использовались без усиливающих экранов. Пленка проявлялась в стандартном проявителе "Рентген- 2", а фиксировалась в 25% растворе тиосульфата натрия.

Метод просветления препаратов приме­няли с целью изучения интраорганных сосудов. Предварительно сосуды заполняли застывающей контрастной массой или аммиачным раствором окиси серебра по В.И.Кошеву, С.А.Добрынину (1980). Для просветления отбирали наиболее удачно налитые кусочки из рогов матки, яйцепроводов и яичников, а также широкой маточной

Рис. 2.1. Экспериментальный рентген- аппарат І2П6-”Газель”

Рис.2.2. Пресс с манометром для определения прочности сосудистой стенки.

I - заливная Еоронка; 2 - кран; 3 - цилиндр гидравлический; 4 - опора цилиндра; 5 - порш­невой шток с резьбой; 6 - манометр; 7 - шланг высокого давления; 8 - канюля

связки. Отобранные кусочки нумеровали, отбеливали в 3% раство­ре перикиси водорода, обезвоживали в спіфтах возрастающей кон­центрации и затем просветляли в метиловом эфире. После чего, приготовленные препараты закрепляли на стекле и высушивали, а более мелкие заключали в канадский бальзам.

Метод коррозии выполняли по А.С.Данцетовой (1955) и Б.А.Башкирову (1965). Он применялся всего в четырех случаях для получения целостного слепка с кровеносных сосудов.

В целях всестороннего изучения сосудистой системы органов размножения, кроме морфологических методов исследования, приме­няли физико-механические и функциональные методы.

Определение прочности стенки магистральных артерий и вен проводили на свежем нефиксирован­ном материале в течение 10 часов после убоя. Давление, необхо­димое для разрыва испытуемых кровеносных сосудов, создавали трансформаторным маслом при помощи сконструированного нагли прес са с манометром типа МИІ-І60 класса 02 с пределом измерения 10 кГ/сгл^ (рис. 2.2). За основу этих исследований были взяты при­боры и методы, используемые А.В.Комаровым (1975 ) и А.Михай­ловым (1979).

Систему прибора заполняли через заливную воронку (I) и кран (2) чистым трансформаторным маслом до вытеснения из нее воздуха.

Рис. 2.3. Радиометр универсальный "КОМЕТА-М" с гамма-датчиком

Рис.2.4. Инструменты, применяемые для введения радиоиндикатора в половые органы.

I - влагалищное зеркало; 2 - ректоскоп; 3 - однограммовый шприц; 4 - иглы;

5 - ватный тампон

Для определения поперечника испытуемых на прочность со- судов и толщины их стенки изготовляли поперечные гистологичес­кие срезы. Оіфаска срезов осуществлялась гематоксилин-эозином.

Радиоизотопный метод клиренса применяли для определения уровня тканевого кровотока в органах размножения. Исследования проводились в радиологической лабора­тории Ш-класса Саратовского зоотехническо-ветеринарного инсти­тута и её филиалах в совхозе "Аркадакский" и племхозе "Смычка" Саратовской области.

В качестве индикатора использовали радиоактивный йод-131 без носителя. Для счета импульсов активности использовали сцинтилляционные гамма-датчики, которые подсоединялись к универ­сальному радиометру "Комета-М" (рис. 2.3). При введении радио­индикатора применяли влагалищное зеркало, ректоскоп с осветите­лем, ватные тампоны, однограммовый шприц и удлиненные иглы, диаметр конца которых соответствовал игле £ 25 (рис. 2.4).

Исследуемую свиноматку фиксировали в индивидуальном станке. Перед началом исследования подготавливали к работе датчики, приборы и определяли радиоактивный фон тела животного. Для обна­жения слизистой оболочки применяли ректоскоп. Затем, с помощью однограммового шприца и удлиненной иглы вводили подэпителиально в слизистую оболочку боковой стенки шейки матки 0,2 мл физиоло­гического раствора, содержащего йод-131, активностью 2-3 микро­кюри. Иногда, после извлечения иглы, выступала капля раствора, которая удалялась ватным тампоном. При введении индикатора соблюдали правила асептики и антисептики.

С помощью гамма-датчика и пересчетного прибора, через одну минуту после введения, делали счет импульсов активности за 15 секунд. Показания импудьсоЕ снимали с прибора и записывали в протокол исследования вначале и через каждые 2 минуты, до сни­жения не менее, чем на половину первоначального значения гал­лу льсов активности.

После рассасывания кровыо радиоиндикатора в данном участ­ке, проводили аналогичные исследования последовательно во вла­галище, преддверии влагалища и в наружной пологой губе.

На основании полученных цифровых данных о рассасывании кровыо введенного индикатора в том или ином органе определяли величину клиренса, характеризующую уровень тканевого кровотока и функциональное состояние микроциркуляторного русла. Эта вели­чина рассчитывалась следующим образом. Записанные показатели числа гол пульсов переводили в десятичные логарифмы. Затем, на полулогарифмической системе координат отмечали: по вертикали ?- оси ординат - логарифмы числа импульсов, по горизонтали - оси абсцисс - время от начала счета в минутах. Отмечая логарифмы импульсов по времени и соединяя образованный ряд точек, получа­ли прямую линию. Отклонение отдельных точек от прямой обусловле но величиной погрешности измерения во время исследования. Сте­пень наклона этой линии и отображала интенсивность всасывания индикатора. Измерив угол наклона, определяли количественную величину клиренса по таблице 2.2.

Во всех случаях величину клиренса можно определить и по формуле Кети ( S. Kety , 1949)

К = _х 230 ,

т, - т,

где К - величина клиренса;

- первоначальное и последующее количество импульсов, переведенное в десятичные логарифмы;

иТ* - период времени между определением Cj и С^;

- 230 - константа.

Таблица 2.2

Расчет константы клиренса йода-131 по величине угла наклона полулогарифмической прямой

Полученный результат - это проценты уменьшения введенной активности в минуту. Для точного расчета необходимо брать лога­рифмы точек, находящихся только на прямой линии.

На основании величин клиренса исследуемых органов выводи­ли среднюю величину, по которой и судили об уровне тканевого кровотока в органах размножения. Уровень кровотока у исследуе­мых свиноматок определяли в двух стадиях полового цикла: в ста­дии уравновешивания и в стадии возбуждения.

Все данные, полученные при исследовании, протоколировали в специальный журнал, делали зарисовки, схемы, рентгенограммы и фотографии. Фотографирование с препаратов производили оте­чественным фотоаппаратом "Зенит-ТТЛ" с набором насадочных ко­лец, а с гистологических срезов с помощью универсального микро скопа МБИ-І5 с фотоприставкой.

Статистическую обработку цифрового материала проводили по Е.К.Меркурьевой (1970) с вычислением средней арифметической - М, средней квадратической - rtv , критерия достоверности - Р, коэффициента корреляции - г , достоверности корреляции - ^2

Относительный прирост вычисляли по формуле:

где К - относительный прирост в %; % - исходная величина;

- последующая величина.