РОЛЬ ТОЧЕЧНЫХ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ lyLMP1 ВИРУСА ЭПШТЕЙНА-БАРР В АКТИВАЦИИ КЛЮЧЕВЫХ СИГНАЛЬНЫХ ПУТЕЙ КЛЕТКИ
Дидук С.В., Смирнова К.В., Гурцевич В.Э.
РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН,г.Москва
Расшифровка молекулярных механизмов опухолевой трансформации клетки онкогенными вирусами человека представляет собой одну из наиболее актуальных проблем современных исследований в онкологии.
Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) в качестве объекта исследований представляет особый интерес, поскольку является убиквитарным герпесвирусом человека, который ассоциирован с широким спектром доброкачественных и злокачественных новообразований разного гистогенеза. Как известно, важнейшим онкобелком ВЭБ является интегральный мембранный белок LMP1. В полноразмерной форме LMP1 часто выявляются значимые точечные мутации, влияющие на функциональную активность этого вирусного онкогена. Аналогичные мутации встречаются и в его укороченной форме – белке lyLMP1. Однако влияние таких мутаций на функциональную активность lyLMP1 остается неизвестной.Задачи исследования: Изучить влияние часто встречающихся аминокислотных замен (S212G, S350A и S366T) в lyLMP1 на индукцию основных транскрипционных факторов клетки NF-kB и AP-1.
Материалы и методы: Для получения экспрессирующих мутантных вариантов lyLMP1 использовали методы искусственного мутагенеза и клонирования. Полученные мутантные варианты lyLMP1, а также его контрольные варианты использовали для трансфекции клеточной линии HEK293. Активность транскрипционных факторов определяли с использованием репортерных плазмид рkB-ConA-Luc и рAP1-Luc.
Результаты: В ходе исследования активации транскрипционного фактора NF-kB выявлено, что lyLMP1-Triple, несущий три мутации в CTAR доменах, а также контрольный вариант lyLMP1 не оказывают достоверного влияния на базовый уровень NF-kB. При этом статистически значимых различий в активации NF-kB между этими клетками и клетками, несущими пустой вектор, не обнаружено. В то же время полноразмерные варианты LMP1 вызывали значительную активацию этого транскрипционного фактора – прототипный LMP1-B95-8 – в 1,4 раза, а высокотуморогенный – LMP1-Cao – более чем в два раза. Измерение уровня активации jun-2 люциферазного репортера также не выявил достоверных различий между lyLMP1-Triple, его контрольным вариантом и клетками, несущими пустой вектор.
Выводы: Полученные данные свидетельствуют о том, что несмотря на широкую распространенность ВЭБ, исследуемые нами мутации в CTAR доменах белка lyLMP1 не оказывают значимого влияния на базовый уровень активации основных транскрипционных факторов клетки. Дальнейшие исследования коэкспрессии укороченной и полноразмерной формы LMP1 помогут нам выяснить в функциональной роли lyLMP1 в канцерогенезе ВЭБ.
Еще по теме РОЛЬ ТОЧЕЧНЫХ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ lyLMP1 ВИРУСА ЭПШТЕЙНА-БАРР В АКТИВАЦИИ КЛЮЧЕВЫХ СИГНАЛЬНЫХ ПУТЕЙ КЛЕТКИ:
- Молекулярные основы болезни Паркинсона, обусловленной мутациями в гене LRRK2
- Мутации в гене LRRK2 и активность фермента
- Влияние мутаций в гене LRRK2 на агрегацию и метаболизм а-синуклеина
- Мутации в гене белка пресенилин-1 приводят к нарушению гомеостаза кальция
- Полинейропатии, обусловленные мутациями в гене транстиретина
- Спектр мутаций в гене LRRK2 и особенности клинического течения LRR^-ассоциированной формы БП
- Мутации в опухолевых клетках.
- Активация свободно-радикальных процессов в клетке
- Изменения активности депо-управляемых и потенциал-управляемых кальциевых каналов, связанные с мутациями в гене белка PS1
- 1.2;2. Роль активации РААС в патогенезе АГ при ХОБЛ
- Роль психоэмоционального стресса и активация нейрогуморальных систем.