ОПИСАНИЕ КУРСА И ПРОГРАММА

1. Общее описание курса

Название курса: «Новые методы иммуногистохимической диагно­стики опухолевого роста».

Цель курса. Классическая диагностика опухолей основана на гистоло­гической оценке степени выраженности тканевого и клеточного атипизма.

Важным направлением молекулярной диагностики опухолей является опре­деление чувствительности опухолей к гормональным воздействиям в организме. Этот вид исследований актуален при изучении эстрогеновых рецепторов в опу­холях женской половой сферы и андрогеновых в опухолях предстательной же­лезы. Выявление рецепторов к гормонам, позволяет оценить степень анапла­стических процессов в опухолевых клетках.

Апоптоз как уникальный генетически запрограммированный клеточный механизм привлекает ученых онкологов, прежде всего тем, что с его патологией может быть связан неограниченный опухолевый рост. В настоящее время из­вестно большое количество факторов препятствующих развитию апоптоза (BCL-2, BCL-X) и способствующих его развитию (Р53, BAX). Выявление по­добных факторов, как правило, не позволяет оценить гистогенетическую при­надлежность опухолевых клеток, но с достаточной определенностью сви­детельствует о степени их анапластических изменений.

В связи с вышеизложенным, целью курса является фундаментальное обу­чение студентов и выпускников медицинских вузов новым методам иммуноги­стохимической диагностики опухолевых заболеваний человека, которые позво­ляют не только дать точную характеристику неопластического процесса, опре­делить прогноз заболевания, но и предложить современные и адекватные мето­ды лечения.

Задача курса, включая сведения:

Задачами курса являются:

- ознакомить слушателей с историей развития иммуногистохимии как науки;

- дать фундаментальные знания о строении и механизмах иммунологи­ческих реакций;

- рассказать об основных методических приемах подготовки тканей для проведения данного исследования (особенностях фиксации тканей, демаскиро­вания антигенов, проведения иммуногистохимической реакции);

- описать основные требования к проведению данной процедуры и о воз­можных ошибках при интерпритации полученных результатов;

- дать характеристику основных цитоплазматических белков в неизме­ненных и малигнизированных клетках;

- привести примеры изучения рецепторов к стероидным гормонам;

- описать маркеры клеточного цикла и апоптотические белки.

Данная разработка учебно-методического комплекса направлена на уг­лубленное изучение медицины в качестве дополнительного образования, может

быть теоретическим курсом по выбору по профилю патологическая анатомия и онкология

Инновационность курса.

Определяется тем фактом, что авторы данного курса активно занимаются научно исследовательской работой по разработке и внедрению в клиническую

практику новых иммуногистохимических методов. По данной теме опублико­ваны монографии:

Бабиченко И.И., Костанян И.А., Липкин В.М. HLDF- новый маркер не­опластических процессов в предстательной железе человека. В кн.: Рак пред­стательной железы. /Под ред. Н.Е.Кушлинского, Ю.Н.Соловьева, М.Ф.Трапезниковой/- М.: Изд. РАМН, 2002, с.289-305;

Фролова И.И., Бабиченко И.И., Местергази Г.М. «Цервикальные интра­эпителиальные неоплазии и дискератозы шейки матки» М.: Издательский дом «Династия», 2004. - 88 с.

И оригинальные статьи в ведущих отечественных и зарубежных журналах:

Ковязин В.А., Костанян И.А., Драницына С.М., Бабиченко И.И. Иммуноги­стохимическое исследование экспрессии факторов апоптоза и рецепторов к сте­роидным гормонам в эндометрии при нормальном менструальном цикле. Вопро­сы гинекологии, акушерства и перинатологии.

Лысенко О.Н., Ашхаб М.Х., Стрижова Н.В., Бабиченко И.И. Иммуноги­стохимические исследования экспрессии рецепторов к стероидным гормонам при гиперпластических процессах в эндометрии. Архив патологии 2004, Т. 66, № 2.- С.7-10.

Babichenko I.I., Lysenko O.N., Dranitsyna S.M., Kostanyan I.A. Simple en­dometrial hyperplasia: BCL-2, HLDF expression and clinical behavior. // Virchows

Archiv, 2003, V. 443, N 3, P. 268.

Фролова И.И., Бабиченко И.И. Клинико-морфологические исследования дискератозов и предрака шейки матки.// Вопросы гинекологии, акушерства и

перинатологии. 2003, Т. 2, № 3, с.19-24.

Babichenko I.I., Lysenko O.N., Dranitsyna S.M., Kostanyan I.A. Simple en­dometrial hyperplasia: BCL-2, HLDF expression and clinical behavior. // Virchows

Archiv, 2003, V. 443, N 3, P. 268.

Фролова И.И., Бабиченко И.И. Клинико-морфологические исследования дискератозов и предрака шейки матки.// Вопросы гинекологии, акушерства и

перинатологии. 2003, Т. 2, № 3, с.19-24.

Фролова И.И., Местергази Г.М., Радзинский В.Е., Шелястина Н.Н., Баби- ченко И.И. Иммуногистохимические исследования дискератоза и неопластиче­ских изменений экзоцервикса при системной гинекологической патологии. Ар­хив патологии, 2002, т.64, № 6, с.23-26.

Совместно с учеными ИБХ РАН был выявлен новый фактор дифферен­цировки клеток - HLDF. показано, что данный фактор иммуногистохимически выявляется в цитоплазме малегнизированных эпителиальных клеток предста­тельной железы человека и опухолях эндометрия. На данный способ диагно­стики была сделана Международная патентная заявка -International filing on pat­ent 2000, N PCT/RuQO/00121, Lipkin V.M, Kostanyan LA., Dranitsyna S.M., Bogachuk A.P., Rodionov I.L., Babichenko I.I., Shelyastiria N.N. Antibodies to HLDF, methods of obtaining, peptide with antigemc and NA-hydrolizing properties and diadnostic method of anaplastic state of human cell.

Инновационность в методике преподавания заключается в том, что дан­ный курс предлагает слушателям, фундаментальные знания в области иммуно­химии, конкретные практические навыки, а также знакомит с оригинальными разработками авторов.

Инновационность по литературе заключается в том, что в ходе обучения слушатели познакомятся публикациями авторов настоящего курса.

Организация обучения будет проводиться в виде лекционных и семинар­ских занятий с использованием мультимедийной техники. Инновационность в организации обучения заключается в том, что кроме лекций и практических за­нятий в ходе самоподготовки слушатели должны будут самостоятельно подго­товить реферативные доклады по тематике курса.

2. Программа курса

Темы лекций

Основы иммунохимии

Тема № 1. Введение. История развития метода. Основные фундаменталь­ные знания в области иммунохимии (2 часа).

Тема № 2. Методические вопросы проведения иммуногистохимической реакции. Подготовка тканей. Фиксация, заливка. Демаскирование антигенов проведение иммуногистохимической реакции (2 часа).

Тема № 3. Оценка результатов иммуно-гистохимической реакции. Обра­ботка полученных данных. Протоколы проведения реакции. Положительные и негативные контроли. Возможные проблемы при проведении реакции (2 часа).

Прикладные вопросы иммуногистохимии.

Тема № 4. Значение клеточных белков для выявления гистогенетической принадлежности опухолевых клеток (2 часа).

Тема № 5. Рецепторные белки в неизмененных и опухолевых клетках (2

часа).

Тема № 6. Белки - маркеры клеточного цикла (2 часа).

Тема № 7. Факторы апоптоза и пролиферации (2 часа).

Тема № 8. Белковые молекулы, характеризующие клеточную адгезию (2

часа).

Тема № 9. Иммуногистохимия ангиогенеза (2 часа).

Практические вопросы онкопатологии.

Тема № 10. Иммуногистохимическая характеристика опухолевых клеток. Опухоли из эпителия (2 часа).

Тема № 11. Выявление гистогенетической принадлежности опухолей ме­зенхимального происхождения (2 часа).

Тема № 12. Дифференциальная диагностика лимфом (2 часа).

Темы семинарских занятий по курсу

Теоретические и методические вопросы иммуногистохимии.

Тема 1. «Основы иммунологии» (3 часа).

1. Строение антител.

2.

3. Моно- и поликлональные антитела.

Литература:

1. Райхлин Н.Т., Петров С. В., Чаиркин И. Н. История иммуногистохи­мии. В кн. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей че­ловека. / Под ред. С.В. Петрова, Н.Т.Райхлина /- Казань, 2000, с.12-14.

2. Хасанов Р.Ш. 2-я всероссийская школа-семинар по иммуногистохи­мической диагностике опухолей. - вопросы онкологии, 200. - т.46, №2. -с.247­248.

Тема 2. «Практические вопросы иммуногистохимии» (3 часа).

1. Условия необходимее для проведения иммуногистохимической реак­ции.

2. Методы фиксации тканей.

3. Демаскирование антигенов.

4. Подготовка срезов и проведение реакции.

Литература.

1. Полак Дж., Ван Норден С. Введение в иммуногистохимию: современ­ные методы и проблемы. М. «Мир» 1987.- с. 9-22.

2. Киясов А. П. Методы иммуногистохимии. В кн. Руководство по имму­ногистохимической диагностике опухолей человека. / Под ред. С. В. Петрова,

Н.Т.Райхлина /- Казань, 2000, с.15-38.

3. Угрюмов М.В. Современные методы иммуноцитохимии и гистохи­мии. «Итоги науки и техники» ВИНИТИ, серия «Морфология», 1991, вып.15.- 115 с.

Тема 3. «Протоколы проведения иммуногистохимических реакций» Кон­трольные вопросы. (3 часа).

1. Прямые методы.

2. Непрямые методы.

3. Протоколы проведения реакций.

4. Положительные и негативные контроли.

5. Интерпретация полученных результатов.

Литература.

1. Полак Дж., Ван Норден С. Введение в иммуногистохимию: современ­ные методы и проблемы. М. «Мир» 1987.- с 22-47.

2. Киясов А.П. Методы иммуногистохимии. В кн. Руководство по имму­ногистохимической диагностике опухолей человека. / Под ред. С.В. Петрова, Н.Т.Райхлина /- Казань, 2000, с.15-38.

Прикладные вопросы иммуногистохимии.

Тема 4. «Значение клеточных белков в оценке гистогенеза опухолей» (3

часа).

1. Общие принципы диагностики.

2. Основные белки - маркеры.

3. Особенности экспрессии белков в различных тканях

Литература:

1. Петров С.В., Райхлин Н.Т.

Н. Т. Райхлина /- Казань, 2000, с.39-57.

Тема 5. «Рецепторные белки клеток и их значение для онкологии» (3 ча­са).

1. Роль рецепторных белков в организме человека.

2. Рецепторы к стероидным гормонам.

3. Рецепторы к факторам роста.

Литература:

1. Побединский Н. М., Балтуцкая О. И., Омельяненко А. И. Стероидные рецепторы нормального эндометрия. // Акушерство и гинекология. - №3. - 2000. - С.5-8.

2. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., Петров В.И. Рецепторы физиологи­чески активных веществ. - Волгоград: «Семь ветров», 1999. - 538с.

3. Лысенко О.Н., Ашхаб М.Х., Стрижова Н.В., Бабиченко И.И. Иммуно­гистохимические исследования экспрессии рецепторов к стероидным гормонам при гиперпластических процессах в эндометрии. Архив патологии 2004, Т. 66, № 2.- С.7-10.

Тема 6. «Клеточный цикл и основные его маркеры» (3 часа).

1. Клеточный цикл.

2. Циклин-зависимые киназы.

3. Иммуногистохимические маркеры клеточного цикла.

Литература:

1. Епифанова О.И. «Лекции о клеточном цикле» Изд.: КМК, 2003, 160 с.

2. Mar K.C. et al. Cell proliferation marker MCM2, but not Ki 67, is helpful

for distinguishing between minimally invasive follicular carcinoma and follicular adenoma of the thyroid.// Histopathology.- 2006.- Vol. 48 (7).- P. 801-807.

3. Копнин Б.П. Основные свойства неопластической клетки и базовые

механизмы их возникновения. Российский онкологический сервер.

(www.rosoncoweb.ru/library/01/02.htm).

Тема 7. Факторы апоптоза и пролиферации (3 часа).

1. Пути активации сигнала апоптоза.

2. Основные белки регуляторы апоптоза.

3. Маркеры пролиферации клеток.

Литература:

1. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). - М.: Ме­дицина, 2001. - 192с.

2. Самуилов В.Д. Биохимия программируемой клеточной смерти (апоп­тоза) у животных // Соровский образовательный журнал - 2001. - Т.7, №10. - С.18-25.

3. Бабиченко И. И., Костанян И. А., Липкин В. М. HLDF - новый маркер анапластических процессов в предстательной железе человека. // В кн.: Рак предстательной железы. /Под ред. Н.Е. Кушлинского, Ю.Н. Соловьева, М.Д. Трапезниковой/ М. Изд. РАМН. 2002. - С.289-305.

4. Райхлин Н.Т., Райхлин А.Н. Апоптоз - основные механизмы развития и роль в онкологической практике. В кн. Руководство по иммуногистохимиче­ской диагностике опухолей человека. / Под ред. С. В. Петрова, Н. Т. Райхлина /­Казань, 2000, с.250-265.

Тема 8. Белковые молекулы, характеризующие клеточную адгезию (3 часа).

1. Межклеточные контакты. Кадхерины, их свойства. Основные группы кадхеринов. Е-кадхерин.

2. Кадхерин и молекулярные механизмы прогрессии опухолей.

3. Роль матриксных металлопротеиназ в прогрессировании и метастази-

ровании рака

Литература.

1. Георгиев Г. П. Молекулярно-генетические механизмы прогрессии опухолей. Соросовский образовательный журнал. 2000.-Т.6, №11,-с.1-7.

2. Van Aken E., De Wever О., da Rocha A.S.C., Mareel M. Defective E- cadherin/catenin complexes in human cancer. // Virchows Arch. - 2001. - V.439. - P.725-751.

Тема 9. Иммуногистохимия ангиогенеза. Контрольные вопросы (3 часа).

1. Роль VEGF - фактора роста эндотелия сосудов в стимулировании опухолевого ангиогенеза.

Литература:

Thornton A.D., Ravn P., Winslet M., Chester K. Блокада ангиогенеза с по­мощью бевацизумаба и хирургическое лечение колоректального рака. Совре­менная онкология. -2007, т.9, №1.- с (http://www.consilium-medicum.com/ media/onkology/07_01/49.shtml).

Практические вопросы онкопатологии.

Тема 10. «Иммуногистохимическая характеристика опухолевых клеток. Опухоли из эпителия» (3 часа).

1. Классификация опухолевых клеток.

2. Иммуногистохимические маркеры плоскоклеточного и переходного эпителия.

3. Маркеры аденокарцином.

Литература:

1. Петров С.В., Райхлин Н.Т., Руководство по иммуногистохимической

диагностике опухоли, Казань, Из-во Титул, 2004, с.110-117.

2. В.О.Магер, Н.В.Казанцева. Прогностическое значение биологических маркеров у больных поверхностным и инвазивным раком мочевого пузыря http://www.uroweb.ru/db/science/article/?id_article=69

3. А. Г. Юрин, Г. Б. Ковальский. Опухоли кишечника (классификации, частота, критерии злокачественности, прогноз, макро- и микроскопическое строение, использование иммуно-гистохимических маркеров для диагностики) // Библиотека патологоанатома. Науч.-практич. журнал - СПб, 2005. - Вып. 59. - 68 с.

Тема 11. «Выявление гистогенетической принадлежности опухолей ме­зенхимального происхождения» (3 часа).

1. Международная классификация опухолей.

2. Основные иммуногистохимические маркеры сарком.

Литература:

1. Pathology and Genetics of Tumours of Soft Tissue and Bone. WHO Classi­fication of Tumours. 2006, v.5.- 427 p.

2. Смирнов А.В. Иммуногистохимия в морфологичекой диагностике опухолей мягких тканей // Руководство по иммуногистохимической диагности­ке опухолей человека / Под ред. Петрова С. В. и Райхлина Н. Т. - Казань: Титул.

2004, с.189-237.

3. Франк Г. А. Проблемы морфологической классификации и диагности­ки опухолей мягких тканей. Практическая онкология 2004, Т.5, с.231-236.

Тема 12. Дифференциальная диагностика лимфом. Контрольные вопросы

(3 часа).

1. Характеристика лейкозов и лимфом.

2. Основные маркеры В-клеточных опухолей.

3. Выявление Т-клеточных опухолей.

Литература:

1. Мазуров В.И., Криволапов Ю.А. Классификация лимфом, морфоло­гия, иммунофенотип, молекулярная генетика неходжкинских лимфом. Практи­ческая онкология, 2004, Т.5, с. 169-175.

2. Тупицын Н.Н. Иммуноморфологическая диагностика гемобластозов. В кн. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. / Под ред. С.В. Петрова, Н.Т.Райхлина /- Казань, 2000, с.149-165.

3. Хансон К.П., Имянитов Е.Н. Эпидемиология и биология неходжкин- ских лимфом. Практическая онкология, 2004, Т.5, с. 163 -169.

Темы самостоятельных работ

1. Получение поликлональных и моноклональных антител.

2. Методы выявления комплекса антиген-антитело на гистологических препаратах.

3. Способы двойного окрашивания гистологических препаратов.

4. Способы устранения неспецифического окрашивания срезов.

5. Значение цитокератинов при исследовании гистогенеза опухолей.

6. Роль белков рецепторов к эстрогенам и прогестерону в практической

онкологии.

7. Рецепторные белки к эпидермальному фактору роста. Значение для диагностики и лечения раковых опухолей.

8. Характеристика рецепторных белков к андрогенам и их значение для лечения рака предстательной железы.

9. Диагностическое значение маркеров пролиферации: Ki-67, MDM2 и циклин D1.

10. Про- и антиапоптотические белки клеток и особенности их экспрес­сии в неопластических тканях.

11. Проапоптотический белок P53 маркер анапластических изменений в опухолевых клетках и их чувствительности к химеотерапии.

12. Особенности функционирования Е-кадхериновой системы в доброка­чественных и злокачественных опухолях человека.

13. Значение для опухолевого роста гиперэкспрессии фактора роста сосу­дов VEGF.

14. Цитокератины в диагностике гистогенетической принадлежности зло­качественных опухолей различных органов.

15. Иммуногистохимический анализ виментин- и десмин-позитивных опухолей.

16. Дифференциальная диагностика ходжкинских и нежоджкинских лим­фом.

17. Иммуногистохимическая характеристика Т-клеточных лимфом.

18. Основные маркеры В-клеточных лимфом.

19. MALT -лимфомы, признаки злокачественности.

20. Основные молекулярно-генетические принципы терапии опухолевого

роста.

Описание системы контроля занятий

По итогам занятий планируется провести разбор рефератов слушателей и Провести три письменных тестирования слушателей по 3 вопроса в каж­

дом варианте, с разбором правильных и неправильных ответов слушателей на темы:

1. Теоретические и методические вопросы иммуногистохимии (1 час).

2. Прикладные вопросы иммуногистохимии (2 часа).

3. Практические вопросы онкопатологии (2 часа).

По окончании каждого раздела выдается контрольные задания в форме тестов.

Примеры тестовых заданий и их выполнения:

Вариант №1.

I. Выберете способы демаскирования антигенов:

1) автоклав;

2) микроволновка;

3) обработка ферментом;

4) все перечисленное.

II. В процессе работы ксилол используется для:

1) удаления парафина;

2) обезвоживания ткани;

3) удаления эндогенной пероксидазы;

4) проявления иммуногистохимической реакции.

III. Диффузная коричневая окраска по всему срезу препарата свидетель­ствует о:

1) неспецифической реакции;

2) выраженной реакции;

3) высокой концентрации первичной сыворотки;

4) неправильно проведенном порядке нанесения сывороток.

IV. Перечислите основные белки-регуляторы апоптоза:

1) P53;

2) Ki-67;

3) BCL-2;

4) VEGF;

5) CK20.

V. Перечислите молекулярно-диагностические маркеры эпителиальных клеток:

1) S-100;

2) HMB-45;

3) Цитокераины;

4) Десмин;

5) CD45.

VI. Маркер Ki-67 характеризует:

1) апоптотическую активность;

2) пролиферативную активность;

3) адгезивные свойства;

4) принадлежность к определенному гистотипу ткани.

VII. Фиксацию тканей проводят:

1) нейтральным формалином;

2) ацетоном;

3) раствором Корнуа;

4) все перечисленное.

VIII. Перекись наносят перед:

1) демаскированием антигенов;

2) нанесением первичной сыворотки;

3) нанесением вторичной сыворотки;

4) нанесением ДАБ.

IX. Перечислите молекулярно-диагностические маркеры мышечных кле-

ток:

1) Виментин;

2) HMB-45;

3) Гладко-мышечный актин;

4) Десмин;

5) CD45.

X. Перечислите маркеры инвазии и метастазирования:

1) Е-кадхерин

2) BAX

3) Металлопротеиназы

4) P21

5) CD44

ОТВЕТЫ:

I. 4; II. 1; III. 1; IV.1,3; V. 3; VI. 2; VII. 4; VIII.2; IX. 3,4; X. 1,3

Примеры вопросов:

1. Что такое моноклональные антитела?

2. Какие существуют методы проведения иммуногистохимической реак-

ции?

Что такое демаскирование антигенов?

Зачем нужен положительный контроль?

Каков механизм действия стероидных гормонов? Что такое иммуногистохимическая панель?

Балльная структура оценки:

Посещение занятий - 12 баллов; Активная работа на семинаре -24 балла; Курсовая работа - 34 балла; Контрольные занятия -30 баллов Всего- 100 баллов.

Шкала оценок: А (5) - 91-100 баллов; В (4) -71-90 баллов; С (3) - 51-70 баллов; D (2) - 50 баллов и менее.

Пояснение оценок:

А - Освоение теоретического материала и практических навыков отлич­но;

В - Освоение теоретического материала и практических навыков хорошо; С - Освоение теоретического материала и практических навыков удовле­

творительно;

D - прослушал курс.