Малые интерферирующие РНК в эффективной индукции апоптоза раковых клеток.

Примером взаимосвязи разных структурных характеристиках генома раковых клеток и функции генов сигнальных путей служит следующий анализ. Мы исследовали эффекты подавления функционального проявления некоторых генов с помощью мaлых интерфирирующих РНК (миРНК) в клеточных линиях РТК: НТ-29 и СаСо2.

Существенной характеристикой линии НТ-29 является наличие мутации в гене АРС, который является также наследственной причиной этого рака. В линии клеток СаСо2 мутация в гене АРС отсутствует. В соответствии с этим мы обнаружили, что экспрессия гена с-Мус в клетках НТ-29 приблизительно в 5 раз больше, по сравнению с экспрессией в клетках СаСо2. После трансфекции клеток миРНК и подавления функции гена с-Мус наблюдали апоптоз в клетках НТ-29 (17%, это в 3раза больше по сравнению с контролем). Подавление гена с-Мус в культуре СаСо2 не приводило к значимому различию в числе апоптотических клеток по сравнению с контролем. При индукции апоптоза с использованием теплового шока (44 0С, 40 мин), нокдаун гена с-Мус приводил к увеличению числа апоптотических клеток. В то же время, апоптотический эффект после теплового шока был более выражен при ингибировании с помощью миРНК функции гена HSPA5 (представителя семейства белков теплового шока 70, HSP70), в обеих клеточных линиях, по сравнению с эффектом подавления гена с-Мус.

Одновременное подавление вышеуказанных генов приводило к апоптозу 90% клеток в культуре НТ-29 и 60% клеток СаСо2, что значительно превышает эффект теплового шока без подавления этих генов. Полученные данные демонстрируют различный эффект от подавления активности одних и тех же генов в раковых клетках в зависимости от структурных изменений в их геноме, а также значение изученных генов для развития способов лечения РТК, особенно опухолей, связанных с мутациями в гене АРС.

Было проведено исследование по стимулированию апоптоза раковых леток с помощью подавления экспрессируемой РНК ряда генов.

Нокдаун генов достигался с помощью микро РНК (siRNA) длинной в 19-22 пар оснований и коротких петлевых РНК (shRNA), экспрессируемых в составе векторов. Определяли усиление апоптотического эффекта действия химиотерапевтических средств и спонтанный апоптоз в результате нокдауна генов на клеточных линиях рака толстой кишки. Был проведён ряд повторно воспроизводившихся экспериментов по РНК интерференции ингибиторов апоптоза (IAP), задействованных в каспазном цикле. В результате работы было показано, что совместная экспрессия анти – IAP-2 и FLIP shRNA при малых дозах оксалиплатина даёт соизмеримый эффект с отдельной 3–кратной дозировкой (LD40) оксалиплатина. «Коктейль» из shRNA (анти – IAP-2 и FLIP) и siRNA (анти IAP-5 и HspA5) приводит к апоптотической гибели клеток, количество которых в 2 раза превышает число апоптотических клеток при действии оксалилплатина указанной выше дозировки. Разные комбинации siRNA и shRNA с LD40 дозой оксалиплатина приводят к 68% апоптотической гибели клеток по сравнению со стандартными 10% в отрицательном контроле и 18% при LD40 оксалиплатина. Полученные данные демонстрируют, что интерферирующие РНК ингибиторов апоптоза могут рассматриваться в качестве перспективного инструмента для разработки новых средств терапии рака, а также для усиления терапевтического эффекта, вызываемого стандартной химиотерапией, и снижения её нагрузки на организм пациента.

<< | >>

↑

Источник: М.Б. Стенина. МАТЕРИАЛЫ КОНГРЕССА. 2010

Еще по теме Малые интерферирующие РНК в эффективной индукции апоптоза раковых клеток.:

- Детская онкология - Кардиоонкология - Лечение онкологических заболеваний - Онкогастроэнтерология - Онконефрология - Паллиативная медицина -

- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -