Иммуногистохимическое исследование экспрессии изучаемых факторов в ткани почки
Для иммуногистохимического исследования использовали материал парафиновых срезов биопсий почек 39 больных ХГН (пациенты отобраны на основании наличия достаточного количества материала в парафиновых блоках).
В отобранных биоптатах изучена экспрессия БТШ-70 и FoxP3 – фактора транскрипции регуляторных Т-лимфоцитов (CD4+CD25+), секретирующих противовоспалительный ИЛ-10. Срезы подвергали депарафинизации в ксилоле и спиртах различной концентрации. Демаскировку антигена проводили кипячением в цитратном буфере. Депарафинизированные срезы после ингибирования эндогенной пероксидазы инкубировали с первичными антителами (для БТШ70 – поликлональныеантитела кролика к БТШ70 («SpringBioscience», США, в разведении 1:800), для FoxP3 – поликлональные антитела кролика к FoxP3 («SpringBioscience», США) в разведении 1:200) 30 мин при комнатной температуре. Для получения окраски использовали систему визуализации - EnVision («DAКO», Дания): препараты инкубировали в течение 30 мин с полимером, коньюгированным с вторичными антителами к иммуноглобулинам мыши и кролика и пероксидазой. Выявление пероксидазной активности осуществляли с помощью хромогенного субстрата DAB+ («DAКO», Дания). В течение 1 мин после появления коричневой окраски препараты промывали и опускали в раствор гематоксилина для окрашивания ядер.
Результаты иммуногистохимического исследования изучаемых медиаторов оценивали полуколичественным методом с использованием следующих критериев: (-) – экспрессия отсутствует; (+) – очаги слабой экспрессии, (++) – множественные очаги умеренной экспрессии, (+++) – множественные очаги выраженной экспрессии.
Изучение биопсийного материала проведено на кафедре патологической анатомии Первого МГМУ им. И.М. Сеченова д.м.н. профессором В.А. Варшавским. Автор выражает особую благодарность морфологам – д.м.н. профессору В.А. Варшавскому и заведующей лабораторией А.В. Бочарниковой за ценную консультативную помощь и возможность проведения морфологической части работы.
Еще по теме Иммуногистохимическое исследование экспрессии изучаемых факторов в ткани почки:
- Иммуногистохимическое исследование экспрессии муцинов в карциномах желудка
- Иммуногистохимическое исследование ткани легких при эмфиземе
- Морфологическое исследование ткани почки.
- 3.8. Патогистологическое и иммуногистохимическое исследование ткани легких при эмфиземе
- Исследование нуклеотидных последовательностей генов, детерминирующих экспрессию факторов патогенности
- Влияние избыточного натрийуреза на состояние тубоинтерстициальной ткани почки
- Иммуногистохимические методы исследования.
- Иммуногистохимическое исследование
- Непрямой иммуногистохимический метод исследования
- Морфологические и иммуногистохимические методы исследования
- Морфологические и иммуногистохимические исследования.
- Результаты иммуногистохимического исследования
- Методика иммуногистохимических исследований
- Иммуногистохимические исследования