Видовая идентификация и биологические особенности грибов рода Malassezia

Для видовой идентификации представителей рода Malassezia было предложено несколько алгоритмов, в основе которых лежат физиологические особенности разных видов. Метод, рекомендуемый S.

1а Рост на среде Сабуро —> М. pachydermatis

1 б Нет роста на среде Сабуро —> 2

2а Каталазная активность положительная —> 3

26 Каталазная активность отрицательная —> М. restricta

За Рост на среде Сабуро с Твин-40 —> 4

36 Нет роста на среде Сабуро с Твин-40 —> 5

4а Рост на среде Сабуро с Твин-80 —> 6

46 Нет роста на вышеуказанных средах —> М. sloofiae

5а Клетки удлиненные, цилиндрические —> М. obtusa

56 Клетки округлые —* М. globosa

6а Рост на среде Сабуро с Кремофором EL —> М. furfur

66 Нет роста на вышеуказанных средах —» М. sympodialis

Данный метод идентификации применялся в частности в исследованиях М. Crespo [58]. D. Senczek [158] помимо твин-40 и твин-80, использовал тес­ты на ассимиляцию твина —20 и твина-60.

По мнению J. Faergmann [73], более практичен алгоритм, при котором учитываются наличие роста на среде Сабуро, каталазная активность, ассими­ляция Cremofor EL (содержит касторовое масло, главным компонентом кото­рого является рициновая кислота), гидролиз эскулина, рост при 38°С. Алго­ритм идентификации выглядит следующим образом:

1а Есть рост на среде Сабуро —» М. pachydermatis

16 Нет роста на среде Сабуро —> 2

2а Каталазная активность положительная —> 3 26 Каталазная активность отрицательная —> М. restricta

За Ассимилирует Кремофор EL —> М furfur

36 Не ассимилирует Кремофор EL —» 4

4а Гидролизует эскулин —> 6

46 Не гидролизует эскулин —> 5

5 а Есть рост на среде Диксона при 38°С —> М.

56 Нет роста на среде Диксона при 38°С —> М. globosa

6а Есть рост на среде Диксона при 38°С —* М. sympodialis

66 Нет роста на среде Диксона при 3 8°С —> М. obtusa

Р. Mayser [119] также указывает на информативность теста на гидролиз эскулина и Кремофора EL. R. Weiss [169] считает наиболее информативными тесты на ассимиляцию Кремофора EL, гидролиз эскулина, каталазную актив­ность, образование пигмента, чувствительность к полидоканолу. Эти же ха­рактеристики использовали для идентификации Р. Raabe [147].

Р. Mayser [123] описал феномен образования темно-коричневого пиг­мента в присутствии триптофана некоторыми видами рода Malassezia. Пред­ложенная авторами пигмент-индуцирующая среда с триптофаном очевидно

может быть использована в качестве дополнительного идентификационного теста.

При идентификации, помимо физиологических особенностей, также имеют значение морфологические и цитоморфологические свойства гриба: цвет, форма, рельеф колоний, форма клетки, ее размер, размер дочерней клетки по отношению к материнской, наличие в культуре мицелиальной формы гриба [19].

С. Aspiroz [22] успешно идентифицировал изоляты Malassezia spp. на основе микроскопических, культуральных и биохимических характеристик (каталазная активность, гидролиз эскулина, липазная активность).

Т. Kaneko [165] предложил схему идентификации Malassezia spp. на ос­нове ранее предложенной ими хромогенной среды LN-CHROMagar. Крите­рии идентификации включали образование зоны преципитации на этой сре­де, каталазную реакцию и наличие роста на специфических средах - агар Са­буро, Кремофор-EL-arap, Твин 60-эскулиновый агар. Эффективность пред­ложенного алгоритма идентификации подтверждена молекулярными анали­зами.

По мнению К. Hammer [92], существенным идентификационным крите­рием для Malassezia spp. является образование зоны преципитации на агаре Диксона. По данным авторов, виды М. sympodialis, М. globosa положитель­ные по этому признаку, виды М. furfur, М. obtusa, М.

Примечательно, что коммерческие тест-системы, предназначенные для видовой идентификации дрожжей (API 20С, Flow Uni-Yeast-Tek), непригод­ны для идентификации грибов рода Malassezia [116].

В ряде случаев авторы сталкиваются с затруднениями при идентифика­ции грибов рода Malassezia на основе общепринятых критериев. Так, в ис­следовании Е. Duarte [65] не удалось идентифицировать 2 изолята, используя тесты на ассимиляцию твинов и кремофора EL, гидролиз эскулина, каталаз­

ную активность и образование пигмента в присутствии триптофана. С помо­щью молекулярных методов удалось идентифицировать изолят от коровы, как липид-зависимый вариант М. pachydermatis, а изолят от собаки — как ати­пичный вариант М. furfur.

В большинстве методик ключевым этапом в идентификации Malassezia spp. является определение липидной зависимости изолята, т.к. единственный зоофильный вид М. pachydermatis в отличии от остальных видов этого рода, способен расти на питательной среде, не содержащей липидов. Для опреде­ления липидной зависимости первичные изоляты дрожжей с лпид- содержащей среды пересевают на среду Сабуро. Это позволяет диагностиро­вать вид М. pachydermatis, наиболее распространенный возбудитель малассе- зиозов животных. Если изолят не способен к росту на этой среде, тогда воз­никает необходимость в проведении дополнительных идентификационных тестов. Очевидно, в повседневной ветеринарной практике будет целесооб­разно ограничиться только определением липидной зависимости клиниче­ского изолята Malassezia spp., а липид-зависимые изоляты при необходимо­сти направлять для видовой идентификации в специализированные миколо­гические лаборатории.

1.5.2.