Микрогельминтоскопические исследования

Используют гельминтоовоскопические и гельминтоларво- скопические методы с целью обнаружения яиц гельминтов и их личинок.

Гельминтоовоскопические методы

При использовании гельминтоовоскопических методов обнаружения гельминтов вначале готовят двоякого рода мазки - нативный и толстый.

Нативный мазок. Небольшое количество фекалий растирают на предметном стекле в капле 50%-ного раствора глицерина или кипяченой воды. Крупные частицы осторожно удаляют, смесь накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом (просматривают два мазка).

Удобнее и проще готовить длинные мазки между двумя предметными стеклами. Делая нативный мазок, следует знать, что при слабых инвазиях в нем редко обнаруживаются яйца гельминтов.

Толстый мазок с целлофаном по Като. Кусочки гидрофильного целлофана (размером 4x2 см) замачивают на 24 ч в смеси глицерина (50 мл) и 6%-ного раствора фенола (500 мл). Около 100 мг фекалий растирают на предметном стекле и, покрывая кусочком влажного целлофана, придавливают резиновой пробкой № 5. Препарат исследуют через 30-60 мин, когда он слегка подсохнет и просветлится, вследствие чего яйца гельминтов легко обнаружатся под малым увеличением микроскопа.

Методы обогащения

Среди методов обогащения используют методы флотации (всплывания) и седиментации (осаждения).

Методы флотации основаны на применении насыщенных растворов различных химических веществ, в которых яйца всплывают благодаря разнице удельного веса.

Метод Кофоида - Барбера в модификации Фюллеборна. Вначале готовят насыщенный раствор поваренной соли, растворяя ее в количестве 400 г в 1 л горячей воды. Получив раствор с удельным весом 1,18, переносят его в объеме 100 мл в высокую и узкую баночку на 100 мл и тщательно размешивают в ней деревянной палочкой 5 г фекалий. Всплывшие на поверхность крупные частицы быстро удаляют палочкой или кусочком бумаги.

Метод Калантарян. Методом Калантарян яйца гельминтов обнаруживаются в фекалиях намного лучше, чем предыдущим способом. Вместо изотонического раствора хлористого натрия применяется насыщенный раствор азотнокислого натрия с удельным весом 1,39. При этом один объем азотнокислого натрия растворяют в равном объеме воды при кипячении, а пленку снимают через 20-30 мин.

М е т о д о с а ж д е н и я (с е д и м е н т а ц и и) яиц гельминтов основан на использовании химических веществ, растворяющих жиры и белки фекалий.

Метод седиментации Телеманна в модификации Мияга- вы. Около 5 г фекалий растирают в ступке или баночке, добавив по 5 мл этилового эфира и 50%-ного раствора соляной кислоты; смесь процеживают через проволочное или волосяное сито в пробирку и центрифугируют. В пробирке образуется три слоя: верхний - эфир с растворенным жиром; средний - соляная кислота с растворенными белковыми веществами; нижний (осадочный) - нерастворимые части фекалий с яйцами гельминтов. Верхние слои сливают, а к осадку добавляют воду и центрифугируют.

Консерванты фекалий. Фекалии для исследования берут порциями в количестве 50 г и в чистой стеклянной или пластмассовой посуде с плотной крышкой направляют в лабораторию.

Для их консервирования предложен ряд растворов: 4-10%- ный раствор формалина, который для предупреждения развития яиц анкилостомид необходимо подогреть до температуры 50-60 °С; смесь 0,2%-ного водного раствора азотнокислого натрия (1900 мл), раствора Люголя (5 г йода, 10 г йодистого калия, 250 мл воды), формалина (300 мл) и глицерина (25 мл), в которой яйца гельминтов сохраняются 6-8 мес.; смесь глицерина (5 мл), формалина (5 мл) и воды (100 мл); 1-1,5%-ные растворы детергентов - моющих средств (по массе соотношение фекалий и раствора детергента 1:5); смесь мертиолата 1:1000 (200 мл), формалина (25 мл), глицерина (5 мл), дестил- лированной воды (250 мл) с добавлением 0,6 мл раствора Люголя (из расчета 1 г фекалий на 10 мл смеси).

Гельминтоларвоскопические методы

Метод Берманна. 5-10 г свежевыделенных фекалий помещают на металлической сетке в стеклянную воронку, на узкий конец которой надета резиновая трубка с зажимом. Во избежание загрязнения осадка частицами кала рекомендуется подкладывать (на сетку) бумагу или добавлять в фекалии животный уголь или кукурузную муку. Воронку наполняют теплой водой (45-50 °С) до соприкосновения с фекалиями. В силу термотроп- ности личинки активно перемещаются в теплую воду и постепенно скапливаются в нижней части воронки над зажимом. Через 3-4 ч зажим открывают, жидкость спускают в 1-2 пробирки, центрифугируют в течение 2-3 мин, верхний слой сливают, а осадок исследуют на предметном стекле под микроскопом.

Метод культивирования личинок анкилостомид на фильтровальной бумаге. Около 0,5 г свежих фекалий наносят на полоску фильтровальной бумаги 15x150 мм так, чтобы края полоски оставались свободными. Полоску помещают в пробирку диаметром 18 мм, содержащую 3 мл воды, закрывают пробкой и выдерживают при температуре 25 °С в течение 5-7 дней. За это время развившиеся из яиц личинки спускаются по бумаге на дно пробирки. Их убивают нагреванием и осадок исследуют под микроскопом; если точного определения вида паразитов не требуется, пробирки просматривают невооруженным глазом.

Метод выявления мирацидиев шистосом. Фекалии промывают в темноте при температуре 8-10 °С, осадок выдерживают 45 мин на ярком свете при температуре 28 °С, затем переливают в темную колбу с трубочкой сбоку. Мирацидии концентрируются в прозрачной боковой трубке, откуда их можно достать.